10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.15.04
ARL5B对食管癌细胞放疗敏感性的影响及机制研究
目的 探讨ARL5B在食管癌组织和细胞中的表达及对放疗敏感性的影响,并初步探索其潜在机制.方法 收集2021-03-01-2022-03-01河北医科大学第四医院胸外科行手术且经病理确诊的30例食管癌患者癌组织和癌旁组织(距离癌组织3~5 cm).实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测食管癌组织,食管癌细胞系TE-1、ECA-109、EC-9706及正常食管上皮细胞系HEEC中ARL5B mRNA和蛋白表达.体外培养食管癌细胞株,转染ARL5B干扰慢病毒载体(ARL5B-siRNA)和ARL5B过表达慢病毒载体(oeARL5B),建立ARL5B抑制(分为ARL5B-siRNA组、NC-siRNA组和TE-1空白组)及过表达模型(分为oeARL5B组、NC-Vector组和EC-9706空白组).给予4 Gy剂量X射线照射细胞建立放疗模型,分为ARL5B-siRNA放疗组、oeARL5B放疗组和TE-1空白放疗组.细胞计数试剂盒(CCK8)检测各组细胞的活性;划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞的迁移侵袭能力;qRT-PCR法检测增殖细胞核抗原(PCN A)、Cyclin D1、p1 6、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP7以及基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP1)mRNA在各组细胞中表达情况;蛋白质印迹实验检测蛋白水平表达.结果 食管癌组织中ARL5B mRNA(Z=-6.653,P<0.001)和ARL5B蛋白表达水平(Z=-3.460,P=0.001)均高于癌旁组织.食管癌细胞株TE-1、ECA-109、EC-9706 及正常食管细胞株 HEEC 中 ARL5B mRNA(F=40.733,P<0.001)和 ARL5B 蛋白表达水平(F=36.382,P<0.001)差异均有统计学意义.构建ARL5B抑制模型后,TE-1空白组、NC-siRNA组和ARL5B-siRNA组ARL5B mRNA(F=129.701,P<0.001)和ARL5B蛋白表达水平(F=26.272,P=0.001)差异均有统计学意义.构建ARL5B 过表达模型后,EC-9706 空白组、NC-vector 组和 oeARL5B 组 ARL5B mRNA(F=13.145,P<0.001)和 ARL5B蛋白表达水平(F=8.924,P=0.016)差异均有统计学意义.放射线照射处理后24、48和72 h,6组细胞活性由高到低分别为oeARL5B组、TE-1空白组、oeARL5B放疗组、ARL5B-siRNA组、TE-1空白放疗组、ARL5B-siRNA放疗组,F值分别为 21.235、38.832 和 20.165,均P<0.001.TE-1 空白组、NC-siRNA 组和 ARL5B-siRNA 组迁移率(F=27.737,P<0.001)和穿膜细胞数(F=27.737,P<0.001)差异有统计学意义.EC-9706空白组、NC-Vector组和oeARL5B组迁移率(F=33.745,P<0.001)和穿膜细胞数(F=35.052,P<0.001)差异有统计学意义.qRT-PCR结果显示,与TE-1空白组及 NC-siRNA 组相比,ARL5B-siRNA 组细胞 PCNA、Cyclin D1、MMP2、MMP7 mRNA 和蛋白表达降低,而 p16、TIMP1 mRNA和蛋白表达升高,均P<0.05;与EC-9706空白组和NC-Vector组相比,oeARL5B组细胞PCNA、Cyclin D1、MMP2、MMP7 mRNA和蛋白表达降低,而p16 mRNA和蛋白表达升高,均P<0.05.结论 ARL5B过表达可能是食管癌放疗抵抗形成的分子基础之一,抑制ARL5B表达可逆转食管癌的放疗抵抗特性,改善食管癌放疗效果.
食管癌、ARL5B、细胞增殖、迁移、侵袭、放疗敏感性
R735.1(肿瘤学)
河北省重点研发计划;河北医学科学研究重点课题
2023-09-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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