10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.01.04
自噬/Beclin1调节因子1通过Akt-Bad-Bcl-2通路降低乳腺癌化疗敏感性
目的 检测自噬/Beclin1调节因子1(Ambra1)在乳腺癌中的表达及对化疗敏感性的影响,并探讨可能的机制.方法 (1)临床标本测定:回顾性收集2018-03-01-2019-12-30在广西医科大学第二附属医院行手术切除的42例乳腺癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学方法检测Ambra1的表达.(2)细胞实验:通过Ambra1慢病毒表达载体(OE),使Ambra1在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞高表达,以空载(Empty)作为对照.蛋白质印迹法分别检测细胞内Akt/pAkt、Bad/pBads136、Bcl-2和Bax的表达,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Akt mRNA表达;同时,细胞用紫杉醇(PTX)处理后,细胞计数盒8(CCK8)法和流式细胞术分别检测细胞存活和凋亡.为了研究pAkt的作用,细胞在感染OE的同时,使用GSK690693(GSK)抑制Akt磷酸化,蛋白质印迹法检测Bad/pBads136、Bcl-2和Bax表达,流式细胞术和CCK8法分别检测紫杉醇诱导的凋亡和细胞存活.结果 (1)临床标本测定:Ambra1在乳腺癌组织中表达率为73.70％,高于正常乳腺组织(36.40％),差异有统计学意义,t=2.147,P=0.037.(2)细胞实验:感染了 OE的MCF-7和MDA-MB-231 细胞内 Ambra1 的相对表达量分别为 1.07±0.09 和 0.63±0.04,高于 Empty 的 0.25±0.03 和 0.22±0.02,差异有统计学意义,t值分别为8.801和10.132,均P＜0.05.而且OE组细胞内Akt/pAkt、pBads136、Bcl-2蛋白,以及Akt mRNA表达均高于Empty组,而Bax蛋白表达低于Empty组,差异有统计学意义,MCF-7的 t值分别为13.132、11.672、4.828、7.163、4.596 和-3.321,MDA-MB-231 的 t 值分别为 4.239、9.966、4.048、7.456、3.479 和-9.181,均P＜0.05.PTX处理后,不同处理组间细胞凋亡率和存活率差异均有统计学意义(MCF-7的F值分别为291.608 和 19.110,均 P＜0.001;MDA-MB-231 的 F 值分别为 339.698 和 15.459,均 P＜0.001).其中 PTX+OE 组细胞凋亡率均低于PTX组,而细胞存活率则高于PTX组,差异有统计学意义,均P＜0.05.Ambra1高表达(OE+),有或无GSK时pAkt、pBads136、Bcl-2及Bax蛋白表达的差异有统计学意义,均P＜0.001.GSK抑制Akt后,各处理组细胞的凋亡率和存活率差异均有统计学意义(MCF-7的F值分别为408.882和51.304,均P＜0.001;MDA-MB-231的F值分别为719.782和38.064,均P＜0.001).其中,PTX+OE+GSK组细胞的凋亡率均高于PTX+OE组,而细胞存活率则低于后者,差异有统计学意义,均P＜0.001.结论 Ambra1在乳腺癌中高表达,其通过Akt-Bad-Bcl-2通路抑制化疗药物诱导的细胞凋亡,降低化疗敏感性.
自噬/Beclin1调节因子1、蛋白激酶B、Bad、乳腺肿瘤、化疗敏感性
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R737.9(肿瘤学)
国家自然科学基金;广西自然科学基金项目
2023-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共11页
20-29,35
