10.16073/j.cnki.cjcpt.2023.01.03
超声微泡介导CTLA-4基因靶向抑制对T淋巴细胞免疫活性及肿瘤免疫杀伤率影响的实验研究
目的 利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)介导T细胞转染,下调细胞毒性T细胞抗原-4(CTLA-4)基因表达,观察转染T细胞免疫活性变化,检测转染T细胞对MGC-803胃癌细胞的体外免疫杀伤率.方法 分离纯化C57小鼠脾脏T淋巴细胞,构建靶向CTLA-4基因的短发夹RNA表达质粒,超声微泡介导CTLA-4质粒转染,设置转染组、阴性对照组和空白组,流式细胞仪分析转染率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测CTLA-4基因表达,蛋白质印迹法检测各分组CTLA-4蛋白表达,流式细胞仪检测各分组T淋巴细胞活性标志CD25表达情况.按照30 ∶ 1靶效比将转染T淋巴细胞与MGC-803胃癌细胞共培养72 h,观察各分组体外肿瘤细胞杀伤率.结果 超声微泡介导shRNA转染率达71.6％,转染组CTLA-4基因和蛋白表达降低.转染组、阴性对照组和空白组CTLA-4 mRNA的表达分别为0.994±0.091、3.571±0.342和3.924±0.422,差异有统计学意义,F=86.374,P＜0.001.转染组、阴性对照组和空白组CTLA-4蛋白相对表达量分别为0.153±0.031、0.517±0.102和0.499±0.094,差异有统计学意义,F=20.394,P=0.002.转染48 h后,转染组T细胞活化标志CD25表达升高,转染组、阴性对照组和空白组CD25表达分别为(29.13±3.73)％、(9.01±1.24)％和(9.33±1.07)％,差异有统计学意义,F=72.034,P＜0.001.转染72 h后,转染T淋巴细胞肿瘤杀伤率增强,MGC-803胃癌细胞杀伤率达到(49.6±5.73)％,而阴性对照组和空白组MGC-803胃癌细胞杀伤率分别为(23.2±1.91)％和(21.6±1.57)％,差异有统计学意义,F=57.138,P＜0.001.结论 通过UTMD介导转染能有效沉默CTLA-4基因和蛋白表达,上调T细胞免疫活性,增强T细胞对MGC-803胃癌细胞体外免疫杀伤作用.
细胞毒性T细胞抗原-4、超声介导微泡破裂技术、基因沉默、T淋巴细胞、肿瘤免疫
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R730.3(肿瘤学)
2023-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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