高铜通过转录水平上调LC3表达诱导肝癌HepG2细胞自噬的研究

摘要：

目的 探究微量元素铜对肝癌HepG2细胞自噬水平的影响,解析铜离子诱导肝癌自噬的分子机制.方法 0、10、50、100和200μmol/L硫酸铜(CuSO4)处理HepG2细胞24 h,100μmol/L CuSO4处理HepG2细胞0、4、8、12、24 h后检测自噬相关蛋白表达,蛋白质印迹法检测HepG2细胞内自噬分子标志物LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和p62,以及线粒体自噬标志分子Parkin表达;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LC3Ⅱ和p62 mRNA表达,细胞计数试剂盒检测细胞活力.RFP-GFP荧光双标LC3慢病毒系统感染HepG2细胞,CuSO4处理表达RFP-GFP-LC3B的HepG2细胞,共聚焦检测自噬流变化.结果 10、50、100、200μmol/L CuSO4作用HepG2细胞后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值呈剂量(F=6519.000,P<0.001)和时间依赖性升高(F=934.300,P<0.001);p62蛋白表达呈剂量(F=55564.000,P<0.001)和时间依赖性降低(F=11413.000,P<0.001).共聚焦结果显示铜离子蓄积诱导HepG2细胞内自噬小体数目(t=30.040,P<0.001)及自噬溶酶体数目(t=272.000,P<0.001)均增加.100μmol/L CuSO4引起HepG2细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加(t=103.600,P<0.001);p62蛋白表达下降(t=146.600,P<0.001),EBSS也引起p62蛋白表达下降(t=146.000,P<0.001);而对Parkin蛋白表达没有影响.100μmol/L CuSO4作用HepG2细胞24 h后LC3ⅡmRNA表达上调,而EBSS饥饿处理则不影响LC3ⅡmRNA表达,F=302.400,P<0.001;p62 mRNA表达均一定程度上调,F=61.750,P<0.001.细胞计数实验结果表明100μmol/L CuSO4和EBSS饥饿均使细胞活力降低,F=111.700,P<0.001.结论 高铜能够通过转录水平上调LC3Ⅱ分子mRNA表达诱导肝癌HepG2细胞内自噬增强.

关键词：肝癌、铜稳态、LC3、自噬、p62

所属期刊栏目：29

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金;辽宁省自然科学基金;省博士科研启动基金计划

在线出版日期：2023-02-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1734-1740