10.16073/j.cnki.cjcpt.2022.22.04
SGK1稳定敲除的弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞株构建及其细胞生物学特征研究
目的 构建血清/糖皮质激素调节激酶1(SGK1)基因敲除的人弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株,分析SGK1基因敲除对SU-DHL-4细胞增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响.方法 采用CRISPR/Cas9技术构建稳定表达绿色荧光蛋白(GFP)SU-DHL-4细胞株,作为SGK1-Ko组,另外设置阴性对照组(sgRNA-NC组),经嘌呤霉素筛选出稳定敲除株,经测序证实,通过RT-PCR及蛋白质印迹法检测基因敲除株的SGK1表达;细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力.2组独立数据在不同时间点的比较采用2因素方差分析,2组间差异比较采用t检验.结果 在荧光显微镜下可观察到SGK1-Ko组GFP稳定表达.SGK1-Ko组RT-PCR产物电泳显示无条带.蛋白质印迹法结果显示,SGK1-Ko组细胞无SGK1蛋白表达.CCK8法结果显示,在细胞培养24、48、72和96 h后,sgRNA-NC组细胞光密度D值分别为0.256±0.002、0.566±0.005、1.246±0.016和1.348±0.021,SGK1-Ko组分别为0.180±0.003、0.321±0.004、0.847±0.056和1.043±0.010,SGK1-Ko组细胞增殖能力低于sgRNA-NC组,F时间=4404.099,P时间<0.001;F组别=439.184,P组别<0.001;F组别×时间=316.874,P组别×时间=0.003.流式细胞术检测结果显示,SGK1-Ko组凋亡率为(10.057±0.350)％,高于sgRNA-NC组的(4.310±0.235)％,t=19.272,P<0.001.SGK1-Ko组处于G0/G1期的细胞比例为(87.020±4.405)％,高于sgRNA-NC组的(70.810±2.707)％,t=4.434,P=0.011;SGK1-Ko组处于S期的细胞比例为(9.343±2.083)％,低于sgRNA-NC组的(27.127±1.343)％,t=10.146,P=0.001.Transwell迁移实验结果显示,SGK1-Ko组细胞24、48 h迁移水平分别为0.117±0.037和0.138±0.046,sgRNA-NC组为0.121±0.033和0.127±0.045,t值分别为0.107、0.238,P值分别为0.920、0.823.结论 成功构建稳定敲除SGK1基因的SU-DHL-4/SGK1-Ko细胞株,SGK1敲除可抑制SU-DHL-4细胞增殖、诱导凋亡和阻滞细胞周期,对细胞迁移无影响.
血清/糖皮质激素调节激酶1、SU-DHL-4细胞株、基因敲除、凋亡、增殖、细胞周期、迁移
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R733.1(肿瘤学)
2022-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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