10.16073/j.cnki.cjcpt.2022.07.05
氯化钴通过c-Raf/MAPK/NF-κB通路对人非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭及迁移影响
目的 探讨体外缺氧微环境对c-Raf/MAPK/NF-κB通路的影响,并观察不同浓度氯化钴(CoCl2)及作用不同时间对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭及迁移的影响.方法 采用CoCl2建立人NSCLC细胞系NCI-H1650和A549细胞体外化学乏氧模型,以作用浓度0μmol/L为对照组,作用不同浓度为实验组.通过不同浓度(100、200、300、400和500μmol/L)的CoCl2分别作用NCI-H1650和A549细胞12 h,CCK-8法检测其存活率.根据半数抑制浓度(IC50)值选择对缺氧环境适应能力较强的A549细胞,用同样方法进一步检测CoCl2浓度为50、100、150和200μmol/L作用于细胞6、8、12、24和48 h的存活率.不同浓度CoCl2作用同一时间,蛋白质印迹法检测细胞HIF-1α、c-Raf、MAPK和NF-κB的蛋白水平.Transwell小室检测CoCl2对细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 当CoCl2作用于A549细胞时,IC50值为927.5μmol/L,作用于NCI-H1650细胞时,IC50值为890.4μmol/L,成功建立缺氧NCI-H1650与A549细胞模型.当不同浓度CoCl2(0～500μmol/L)作用于H1650细胞时,CoCl2作用浓度对细胞存活率无影响,差异无统计学意义,F=2.942,P=0.058;作用于A549细胞时,细胞存活率分别为(1.05±0.04)％、(1.01±0.11)％、(0.81±0.05)％、(0.80±0.01)％、(0.77±0.02)％和(0.51±0.05)％,差异有统计学意义,F=30.930,P<0.001.其中,当浓度>100μmol/L时,各浓度组存活率均高于对照组,差异有统计学意义,均P<0.05.当CoCl2作用时间为6～48 h,作用浓度一定时,A549细胞存活率无明显改变,差异无统计学意义;当CoCl2作用时间不变,存活率随着浓度的增加而下降,并呈浓度依赖性,差异有统计学意义.与CoCl2作用浓度0μmol/L〔(38.33±7.64)个〕相比,作用浓度分别为50、100、150、200μmol/L时A549细胞迁移数分别为(60.67±7.02)、(83.33±5.03)、(131.67±12.58)和(161.34±47.37)个,差异有统计学意义,F=127.671,P<0.001;其中,当CoCl2浓度≥50μmol/L时迁移能力均高于对照组,差异有统计学意义,t值分别为-3.728、-8.521、-10.983和-22.115,P值分别为0.020、0.001、<0.001和<0.001.各组蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义,均P<0.05.结论 CoCl2模拟的缺氧可以使NSCLC细胞增殖、侵袭和转移增加,其机制与c-Raf/MAPK/NF-κB信号通路相关.
非小细胞肺癌、丝氨酸激酶、c-Raf/MAPK/NF-κB、增殖、侵袭、迁移
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R734.2(肿瘤学)
国家自然科学基金;天山青年计划项目;新疆自治区科技支疆计划
2022-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
475-480,500
