上皮间质转化MACC1对结肠癌细胞HT-29增殖迁移和侵袭影响

摘要：

目的 探讨基于上皮间质转化(EMT)研究结肠癌转移相关基因1(MACC1)对结肠癌细胞HT-29增殖迁移和侵袭的作用机制.方法 人结肠癌HT-29细胞株购自中国科学院上海细胞研究所.转染shRNA敲降MACC1表达,RT-PCR和蛋白质印迹法筛选最佳敲降shRNA.根据随机对照法将细胞分为HT-29细胞对照组(HT-29组)、HT-29细胞转染shRNA-2组和HT-29细胞空白转染组.MTT法检测细胞增殖能力,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测EMT标志物(E-cadherin和Vimentin)的mRNA和蛋白表达水平,免疫荧光法标记细胞骨架中的肌动蛋白和微管蛋白表达.结果 当转染shRNA-2的干扰质粒后,MACC1基因的表达水平为0.31±0.08,与 HT-29组(1.02±0.06)相比差异有统计学意义,F=46.43,P＜0.01.与 HT-29组的(0.02±0.04)％相比,转染 shRNA-2后细胞在24、36、48、60和72 h 时增殖率分别被抑制(11.00±1.06)％、(28.33±3.79)％、(37.00±4.17)％、(41.33±4.04)％和(43.33±5.03)％,差异有统计学意义,F=27.52,P＜0.01.Trans well细胞迁移和侵袭实验表明,与HT-29组(1.05±0.05,1.02±0.06)相比,转染shRNA-2后细胞迁移和侵袭数比率分别为0.41±0.03和0.24±0.04,差异有统计学意义,F值分别为56.01和110.82,均P＜0.01.敲降MACC1后,E-cadherin mRNA表达量上调为1.59±0.06,而Vimentin mRNA表达量下调为0.36±0.05,与 HT-29组(0.99±0.13,0.99±0.17)相比,差异有统计学意义,F值分别为42.40和34.03,均P＜0.01.蛋白质印迹结果显示,E-cadherin蛋白表达量上调为2.09±0.02,Vimentin蛋白表达量下调为0.44±0.02,与HT-29组(1.02±0.02,1.04±0.03)相比,差异有统计学意义,F值分别为945.91和374.82,均P＜0.01.敲降MACC1的表达后细胞的骨架蛋白Actin染色减弱,骨架排列紊乱;但细胞的微管蛋白增强.转染shRNA-NC组的细胞各项检测指标与HT-29组均差异无统计学意义,均P＞0.05.结论 敲降结肠癌细胞HT-29的MACC1可上调E-cadherin表达,下调Vimentin表达,改变细胞骨架阻止EMT过程,进而抑制HT-29结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.

关键词：MACC1;上皮间质转化;结肠癌细胞HT-29;细胞增殖;迁移;侵袭

所属期刊栏目：28

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：新疆维吾尔自治区自然科学基金2017D01C386

在线出版日期：2021-12-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1072-1079