高表达SMS1效应性T细胞对卵巢癌细胞凋亡影响机制研究
目的 神经鞘磷脂酶1 (sphingomyelin synthesis1,SMS1)是催化鞘磷脂生物合成的关键酶之一,与细胞凋亡密切相关,在免疫抗肿瘤研究中较为鲜见.本研究探讨高表达SMS1效应T细胞对卵巢癌细胞增殖和凋亡活性的影响.方法 采用密度梯度离心法收集人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),体外采用协同抗CD3抗体、CD28抗体、重组白介素2(interleukin 2,IL-2)和重组IL-15刺激活化T细胞.构建pCMV.sport 6-SMS1,并将SMS1基因转染或空质粒至T细胞,分为SMS1转染组和对照组.经甲胎蛋白(alpha-fetal protein,AFP)刺激活化,分别与SKOV3、OVCAR3、A2780细胞共培养.采用四唑盐(methyl thiazolyl tetrazolim,MTT)比色法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性.采用EIISA试剂盒检测共培养上清中γ干扰素(interferonγ,IFNγ)和IL-2含量.结果 SMS1基因转染T细胞经肿瘤抗原刺激后充分活化,T细胞受体(T cell receptor,TCR)+细胞比例为(32.83±2.17)％,高于对照组,n=8,t=29.941,P＜0.001;SMS1转染组CD45RO+细胞比例为(31.23±3.41)％,同样高于对照组,n=8,t=18.715,P＜0.001.qRT-PCR方法检测,AFP表达量SKOV3细胞为(0.72±0.13),OVCAR3细胞为(0.75±0.14),A2780细胞为(0.38±0.10),SKOV3细胞和OVCAR细胞AFP表达量高于A2780细胞,n=8,F=21.798,P＜0.001.SMS1转染效应性T细胞对SKOV3、OVCAR3、A2780细胞的杀伤率以及促凋亡率高于对照组;且呈效靶比依赖性.但SMS1转染效应性T细胞对A2780细胞抑制生长的作用和促凋亡作用明显低于SKOV3和OVCAR3细胞,F=189.390,P＜0.001.SMS1转染组靶细胞与卵巢癌细胞40∶1共培养24 h后,培养上清中IFN-γ的含量SKOV3细胞为(32.74±10.18) ng/mL,OVCAR3细胞为(34.49±12.72) ng/mL,A2780细胞为(18.65±6.37) ng/mL,n=8,F=5.91,P＜0.05;另外,培养上清中IL-2的含量SKOV3细胞为(2 378.64±579.23) pg/mL,OVCAR3细胞为(2 057.85±492.73) pg/mL,A2780细胞为(1 274.68±242.14) pg/mL,n=8,F=7.91,P＜0.05.结论 上调SMS1基因表达后可诱导T细胞分化并识别肿瘤抗原,从而促进卵巢癌细胞的凋亡.
神经鞘磷脂酶1、卵巢癌、过继性T细胞、免疫逃逸、转染
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R737.31(肿瘤学)
国家自然科学基金81360382
2019-08-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
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