原花青素介导的自噬流对喉癌细胞增殖影响及其机制探讨
目的 原花青素(procyanidins,OPC)通过抑制细胞周期、促进凋亡等机制发挥抗肿瘤作用.本研究旨在探讨OPC介导的自噬流对喉癌TU686细胞增殖活力的影响,并进一步探究OPC促进喉癌TU686细胞自噬流可能的分子机制.方法 单丹磺酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色法及流式细胞术检测不同浓度OPC对TU686细胞自噬的诱导作用;蛋白质印迹法检测TU686细胞LC3-Ⅱ和p62蛋白表达变化;并从翻译水平检测相关Atg蛋白表达,使用SiRNA干扰Atg5基因,并采用q-PCR和蛋白质印迹法检测干扰后Atg5转录和翻译水平变化,进一步检测干扰Atg5对LC3Ⅱ和p62影响;检测PI3K/AKT途径中活化PI3K p85α和磷酸化P-AKT1蛋白表达情况,采取PI3K/AKT途径激动剂胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与OPC共培养细胞的方式以阐明PI3K/AKT途径在OPC诱导的自噬流中具体作用.CCK-8法和台盼蓝染色法检测OPC诱导的自噬流对TU686细胞增殖活力影响.结果 OPC处理组(20～40 μg/mL) LC3-Ⅱ相对蛋白表达量高于0加药组,F=1 688.710,P＜0.001;p62相对蛋白表达量低于0加药组,F=73.875,P＜0.001.40 μg/mL OPC作用后Atg5和Atg12蛋白相对表达量分别为3.20±0.08和7.52±0.13,高于0加药组,F值均为-3.079,P值均为0.012;40μg/mL OPC作用后PI3K p85α和P-AKT1蛋白相对表达量分别为0.18±0.01和0.48±0.06,低于0加药组,F值均为3.079,P值均为0.012.IGF 1可以逆转OPC引起的LC3-Ⅱ升高和p62降低,与CON组相比,OPC组、IGF-1组和OPC+ IGF-1组LC3-Ⅱ相对表达量分别为10.32±0.31、1.02±0.20和5.73±0.11,均P＜0.001;p62相对表达量分别为0.64±0.02、1.03±0.02和0.87±0.01,均P＜0.001.3-MA预处理后可以逆转OPC引起的LC3-Ⅱ和p62变化,与CON组相比,OPC组、3-MA组和OPC+ 3-MA组LC3-Ⅱ蛋白相对表达量分别为4.74±0.10、1.05±0.13和1.81±0.05,均P＜0.001;p62蛋白相对表达量分别为0.59±0.02、0.94±0.03和0.78±0.03,P值分别为＜0.001、0.002和＜0.001.SiRNA干扰Atg5后,抑制OPC引起的LC3-Ⅱ和p62变化,与NC相比,NC+OPC组、Si-Atg5组和Si-Atg5+OPC组中LC3-Ⅱ相对表达量分别为9.43±0.36、1.14±0.11和6.08±0.22,均P＜0.001;p62相对表达量分别为0.28士0.02、1.03±0.02和0.68±0.02,均P＜0.001.CCK-8结果显示与CON组相比,OPC组、3-MA组和OPC+ 3-MA组细胞活力分别为(49.53±4.29)％、(95.29±1.80)％和(67.19±0.31)％,P值分别为＜0.001、0.001和＜0.001.与CON组相比,NC+ OPC组、Si-Atg5组和Si-Atg5+ OPC组细胞活力分别为(49.53±4.29)％、(100.44±0.50)％和(73.01±1.23)％,均P＜0.001.结论 OPC可能通过抑制PI3K/AKT途径促进喉癌TU686细胞自噬流的通畅,并抑制TU686细胞增殖活力.
原花青素、PI3K/AKT通路、喉癌、自噬流
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R739.65(肿瘤学)
广州市科技计划201604020005,201804010201;广东省医学科研基金B2018004;广州市医药卫生科技项目20181A011047
2019-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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