抑制PAG1表达逆转喉癌细胞原发性放射抗拒机制探讨
目的 鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白(phosphoprotein associated with glycosphingolipid microdomains 1,PAG1)是定位于细胞膜脂筏的跨膜接头蛋白,与肿瘤的发生发展有着密切关系.本研究探讨抑制PAG1表达对喉癌细胞原发性放射抗拒的影响.方法 针对人PAG1 mRNA序列,设计3条特异性shRNA序列,与酶切后的GV248质粒连接形成表达载体.测序鉴定正确后,经脂质体介导分别转染原发性放射抗拒喉癌细胞Hep-2max,荧光定量PCR及蛋白质印迹法验证干扰效果,筛选出最佳靶向序列.进而使用含最佳靶向序列的载体转染Hep-2max细胞,嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞.8 Gy放射线处理后,流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡情况.结果 荧光定量PCR及蛋白质印迹结果显示,PAG1-shRNA1干扰位点的质粒干扰效果最佳,并获得稳定转染细胞模型.流式细胞术检测结果显示,空白对照组、阴性质粒对照组和PAG1干扰组G2/M期细胞所占比例分别为(39.17±1.62)％、(35.58±1.94)％和(45.28±1.68)％,F=9.837,P=0.0131;细胞凋亡率分别为(28.46±2.43)％、(29.25±2.89)％和(43.68±1.78)％,F=12.67,P=0.0111.结论 抑制PAG1的表达可促进原发性放射抗拒喉癌细胞Hep-2max凋亡,增加G2/M期细胞比例,从而逆转细胞原发性放射抗拒,并为喉癌放射增敏研究提供新的靶点.
鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白、RNA干扰、喉癌、原发性放射抗拒
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R739.6(肿瘤学)
国家自然科学基金81502666,81602391,30800282;湖北省自然科学基金2015CFA076
2018-06-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
1700-1705
