沉默泡膜蛋白1对SW480细胞增殖与侵袭影响的研究
目的 泡膜蛋白1(vacuole membrane protein-1,VMP1)是近年来新发现的一个重要功能的抑癌基因.为明确VMP1在结直肠癌中的功能和意义,本研究通过慢病毒载体沉默结直肠癌细胞系SW480中VMP1基因的表达,探讨VMP1基因沉默后对结直肠癌细胞增殖、凋亡及迁移的调控作用.方法 应用RT-PCR及蛋白质印迹法检测5种结直肠癌细胞系中VMP1的表达状况;设计人VMP1基因的shRNA慢病毒载体,在293T细胞中包装病毒并感染VMP1高表达的结直肠癌细胞系,运用蛋白质印迹法鉴定其对VMP1基因的沉默效果;VMP1基因沉默后,通过MTT法和软琼脂克隆形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞技术检测细胞凋亡;运用Transwell迁移实验检测细胞的体外侵袭迁移能力.结果 VMP1在5种细胞系中存在差异性表达.具有低转移潜能的HT-29和SW480细胞与具有高转移潜能的LoVo、RKO和SW620细胞相比,有更高的VMP1表达水平,其中mRNA表达差异有统计学意义,t=3.88,P=0.005;而蛋白表达差异有统计学意义,t=14.29,P＜0.001.选取低转移细胞株中VMP1表达相对较高的SW480细胞作为研究对象,构建VMP1 shRNA慢病毒载体沉默SW480细胞中VMP1的表达.蛋白质印迹结果提示,VMP1稳定沉默的SW480细胞构建成功.在稳定沉默VMP1基因后,MTT法显示SW480细胞的增殖速度在24和48 h显著升高,F值分别为79.77和12.35,P值分别为＜0.001和0.025.软琼脂克隆形成实验结果显示,SW480细胞的集落数目显著增多,F=75.23,P＜0.001.二者均表明SW480细胞增殖能力增强.流式细胞技术检测显示,VMP1基因沉默后可抑制SW480细胞凋亡,F=84.44,P＜0.001.Transwell迁移实验结果显示,VMP1沉默后SW480迁移能力增强,F=155.90,P＜0.001.结论 VMP1基因可能与结直肠癌的细胞增殖、凋亡与转移有关,进而参与了结直肠癌的发生、发展.
结直肠肿瘤、泡膜蛋白1、细胞增殖、迁移
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R735.3(肿瘤学)
浦东新区卫生系统优秀青年医学人才资助项目PWRq2012-31;上海市自然科学基金面上项目13ZR1437300
2016-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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