蟾蜍灵对恶性黑色素瘤侵袭转移及其VEGF和MMP2表达的影响
目的 恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是由黑色素细胞恶性转化形成,是具有高侵袭和高转移特性的恶性肿瘤.我国黑色素瘤发病率呈逐年上升趋势.侵袭转移是导致黑色素瘤患者复发、死亡的主要原因.因此,寻找可抑制黑色素瘤侵袭转移的药物,已成为国内外肿瘤预防和治疗的研究热点.本研究探讨蟾蜍灵(Bufalin)作用于恶性黑色素瘤B16细胞后对其侵袭迁移及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP2)表达的影响.方法 以终浓度分别为10-5、10-6、10-7和10-8 mol/L Bufalin处理B16细胞24、48和72 h后,MTT法检测Bufalin对B16细胞增殖抑制影响;细胞划痕实验和Transwell小室侵袭迁移实验分析Bufalin处理后细胞迁移和侵袭能力的改变.免疫组织化学法检测Bufalin对小鼠体内恶性黑色素瘤组织中VEGF、MMP2蛋白表达的影响.RT-PCR法检测Bufalin对体外B16细胞VEGF、MMP2、钠钾ATP酶α1和β亚单位mRNA表达的影响.结果 MTT检测结果显示,浓度为10-5～10-7 mol/L Bufalin对B16细胞的抑制呈现明显的剂量及时间依赖性.细胞划痕实验结果显示,实验组和对照组细胞平均迁移率不同,实验组细胞迁移较缓慢,迁移距离较短;划痕24 h对照组细胞迁移数为98.1±8.9,10-5 mol/L时Bufalin组细胞迁移数(个)和抑制率(％)分别为36.6±3.8和61.0±2.1,10-6 mol/L时分别为58.8±4.1和39.8±1.6,10-7 mol/L时分别为82.4±6.7和18.4±0.9,10-8 mol/L时分别为89.8±7.1和20.4±0.9;随着药物浓度的降低,细胞迁移数及抑制率均降低.Transwell小室实验结果显示,Bufalin对B16细胞作用后,穿过Transwell小室的细胞数随着Bufalin作用时间的延长与浓度的增加而明显减少;10-5 mol/L时,Bufalin作用于B16细胞的侵袭率(％)和侵袭抑制率(％)分别18.40±3.51和81.60±4.16,10-6 mol/L时分别为21.40±2.51和78.50±4.50,10-7 mol/L时分别为79.60±4.03和20.40±3.56;表明随着药物浓度的降低,Bufalin作用于B16的细胞侵袭率和侵袭抑制率均有降低趋势.免疫组化实验结果显示,Bufalin作用于恶性黑色素瘤小鼠后,肿瘤组织中VEGF和MMP2蛋白分布于细胞质,SP法染色呈棕黄色,阳性表达率为(29±1)％,明显低于对照组的(88±3)％,t=69.74、P=0.01.RT-PCR实验结果显示,2 mol/L Bufalin作用B16 48 h的VEGF表达水平为0.572±0.019,高于24 h的0.476±0.058;2 μmol/L Bufalin作用B16 48 h的MMP2表达水平为2.329±0.157,低于24 h的7.311±0.088;2μmol/L Bufalin作用B16 48 h的ATPα1亚单位表达量为0.281±0.011,低于24 h的3.010±0.107;2 μmol/L Bufalin作用B16 48 h的ATPβ亚单位表达量为3.923±0.050,高于24 h的3.109±0.013;以上差异均有统计学意义,P＜0.05.结论 Bufalin对B16细胞的增殖抑制作用具有明显的浓度和时间的依赖性,对B16细胞的迁移能力及侵袭能力的抑制作用明显.Bufalin抑制恶性黑色素瘤体内肿瘤组织和体外细胞系B16的VEGF和MMP2蛋白及mRNA的表达.
黑色素瘤(B16)、蟾蜍灵(Bufalin)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白2(MMP2)
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R739.5(肿瘤学)
武警后勤学院面上资助项目WHM201209;WYM201104
2016-03-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1747-1753
