mTOR与ERK对Hep3B细胞cyclin D1表达的协同调控分子机制

摘要：

目的 探讨Hep3B细胞中调控cyclin D1过表达的分子机制.方法 提取正常肝细胞LO2和肝癌细胞Hep3B的总RNA和蛋白,RT-qPCR和蛋白质印迹法检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平以及细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、磷酸化ERK 1/2 (phosphorylation-ERK1/2,p-ERK1/2)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(phosphorylation mammalian target of rapamycin,p-mTOR)和核因子-KB抑制蛋白α亚基(nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor alpha,IκBα)的蛋白表达水平.ERK、mTOR和NF-κB抑制剂处理Hep3B细胞,检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达变化.结果 与LO2相比,Hep3B中cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平分别升高115.73(t=36.617,P=0.009)和22.60倍(t=8.457,P＜0.001),p-ERK1、ERK1和p-mTOR的蛋白表达水平分别升高10.87(t=5.903,P=0.004)、24.77(t=23.284,P=0.002)和20.60倍(t=24.492,P＜0.001),IκBα的蛋白表达水平差异无统计学意义,t=35.923,P=0.058.ERK抑制剂PD184352处理Hep3B细胞,对p-mTOR蛋白表达水平没有明显影响,但cyclin D1的mRNA表达水平显著下降,F=52.53,P＜0.001;其蛋白表达水平也随之在6～24 h显著降低,F=5.285,P=0.009.mTOR抑制剂Rapamycin处理Hep3B细胞,显著提升了p-ERK蛋白的表达水平,F=0.004,P＜0.001;也显著升高了cyclin D1 mRNA的表达水平,F=587.47,P=0.002;但cyclin D1的蛋白表达水平在6～24 h显著降低,F=0.002,P＜0.001.同时用ERK和mTOR的抑制剂处理Hep3B细胞,与ERK抑制剂的处理结果相同.NF-κB抑制剂BAY11-7082处理Hep3B细胞对cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平没有显著影响.结论 mTOR和ERK1是调控Hep3B细胞cyclin D1表达主要信号分子,mTOR对ERK的抑制作用可能是维持适当cyclin D1蛋白水平的重要调控机制.

关键词：cyclin D1、ERK、mTOR、NF-κB、肝癌

所属期刊栏目：22

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30872950

在线出版日期：2015-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1352-1356