富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白片段克隆表达及纯化

摘要：

目的:表达并纯化富含T细胞表位的肿瘤成纤维细胞激活蛋白(fibroblast activation protein,FAP)片段.方法:利用T细胞表位预测软件及酶切位点预测软件分析FAP全长,选取FAP蛋白内富含T细胞表位又缺少酶切位点的多肽AA264～AA449(NP_032012.1)作为目的表达片段.该多肽所对应的核酸片段为mRNA798～1418(GenBank:BC019190.1).利用PCR技术从含有FAP基因全长的质粒pCDNA3.1-FAP中扩增目的基因mRNA798～1418,并将该基因与原核表达载体pET-28a(+)连接,在BL21工程菌中实现重组蛋白His6-FAP264-449的表达,并利用His标签进行纯化.结果:成功构建了富含T细胞表位的FAP原核表达质粒pET-28a(+)-FAP798-1418,对该质粒进行BamH1/Xho1双酶切鉴定,鉴定结果与预期完全一致;实现了对该质粒编码的融合蛋白His6-FAP264-449的表达,表达后的融合蛋白主要以包涵体的形式存在;利用His标签纯化了该融合蛋白,纯化后灰度分析其纯度达95％.结论:成功表达并纯化了富含细胞表位的FAP片段,为下一步以FAP为靶标的肿瘤免疫治疗策略提供了实验基础.

关键词：肿瘤、T细胞表位、成纤维细胞激活蛋白、原核表达、纯化

所属期刊栏目：21

分类号：R730.3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81201763;广东医学院科研基金B2010001

在线出版日期：2014-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-4