SS-PEI/核酸纳米复合物的构建分析

摘要：

目的:构建一种可生物降解的基因载体,并观察其体外转染DNA/siRNA的效率和细胞毒性.方法:采用低分子质量PEI与3,3'-二硫代二丙酸在催化剂作用下合成可降解的PEI衍生物SS-PEI,用红外波谱仪和核磁波谱仪分析其化学结构；动态光散射分析动态光散射(dynamic light scattering,DLS) SS-PEI/DNA和SS-PEI/siRNA的粒径；采用流式细胞技术(FCM)和荧光激活细胞分类术(FACS)分别分析SS-PEI对GFP-DNA和FAM-dsRNA的转染率；通过GFP表达水平分析SS-PEI对GFP质粒和GFP-siRNA的转染效率；采用考马斯蓝法分析SS-PEI/DNA和SS-PEI/siRNA的细胞毒性.结果:红外波谱和核磁波谱与SS-PEI理论波谱一致；DLS结果显示,SS-PEI/DNA复合物粒径为95～175 nm,SS-PEI/siRNA平均粒径约200 nm.FCM结果显示,SS-PEI对DNA的最大转染率为(25.2±2.3)％,稍低于HWPEI组的(33.8±3.1)％；SS-PEI/GFP-DNA转染后GFP的表达水平与HWPEI转染组接近[(150±7)FI(A.U.)/mg蛋白vs(168±18) FI(A.U.)/ng蛋白],差异无统计学意义,t=1.62,P=0.18；细胞毒性分析显示,SS-PEI/DNA组细胞活力(89±5.2)％,显著高于HWPEI/DNA组的(70±4.9)％,差异有统计学意义,t=4.61,P=0.001.FACS结果显示,SS-PEI对FAM-dsRNA的转染率为(86.5±2.5)％；SS-PEI转染GFP-siRNA,靶基因GFP被显著敲除,相对表达水平为(42±3.5)FI(A.U.)/mg蛋白,与对照组的(79±10.8)FI(A.U.)/mg蛋白相比差异有统计学意义,t=5.64,P=0.004.结论:SS-PEI的合成可明显提高装载核酸的效率,具有低毒和高效等特点.

关键词：聚乙烯亚胺、DNA、小干扰RNA、质粒、流式细胞术

所属期刊栏目：20

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：上海市第七人民医院"七院新星"基金XX2012-028

在线出版日期：2013-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1478-1483