HPV16 E7蛋白对TNF-α诱导食管癌细胞凋亡及其机制的探讨
目的:探讨HPV16 E7蛋白表达对TNF-α诱导的食管癌细胞凋亡的作用及其机制.方法:构建HPV16 E7蛋白高表达的食管癌细胞系KYSE150,药物处理后利用流式细胞学检测及PARP蛋白的切割来鉴定细胞凋亡.蛋白质印迹法检测代表AKT活性的AKT473位丝氨酸磷酸化水平,荧光素酶报告基因实验检测Survivin的转录活性.结果:TNF-α与放线菌素D可以诱导食管癌细胞KYSE150发生细胞凋亡.空载细胞的细胞凋亡率从0h的1.2％增加到10h的12.1％和20 h的26.5％；E7高表达的KEYE150细胞凋亡率从0h的2.5％增加到10h的20.9％和20 h的40.5％.与空载相比,HPV16 E7表达的细胞凋亡率明显增多,在处理20 h后E7表达的KYSE150细胞凋亡率为对照细胞的1.53倍.HPV16 E7高表达的KYSE 150细胞PARP的116×103条带弱于对照细胞,而89×103条带则明显强于对照组.KYSE150GFP-E7细胞AKT143丝氨酸磷酸化水平仅为对照细胞的57.4％.TNF-α/ACD处理可以引起AKT磷酸化水平升高,但KYSE150GFP-E7细胞中AKT磷酸化水平的升高仍低于对照细胞.E7蛋白表达使得Survivin启动子区活性下调42.8％,而外源性过表达c-AKT及持续活化型AKT(myr-AKT)则使Survivin启动子区活性回复.外源性过表达AKT可以拮抗HPV16 E7对于TNF-α诱导的细胞凋亡的促进作用.结论:初步研究结果提示,HPV16 E7蛋白表达可促进TNF-α诱导的食管癌细胞凋亡,其分子机制可能是抑制AKT-Survivin通路.
人乳头状瘤病毒E7蛋白、TNF-α、食管肿瘤、细胞凋亡、AKT-Survivin通路
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R734.2(肿瘤学)
国家自然科学基金31171322;国家自然科学基金创新团队81021061;国家重大科学研究计划2011CB910704
2013-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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