shRNA干扰Bmi-1基因表达载体构建及其对膀胱癌5637细胞增殖抑制作用的研究
目的:构建shRNA体内表达载体pGeneClipTM-shRNA,研究抑制Bmi-1基因表达对膀胱癌5637细胞凋亡的影响.方法:构建靶向Bmi-1的shRNA真核表达质粒pGeneClipTM-B1、pGeneClipTM-B2以及pGeneClipTM-B-neg(阴性对照质粒),采用脂质体转染试剂转染膀胱癌5637细胞,采用RT-PCR、蛋白质印迹法技术检测转染前后5637细胞中Bmi-1基因表达的变化;利用MTT法检测表达质粒对5637细胞增殖的影响;并利用流式法和蛋白质印迹法技术检测表达质粒对5637细胞凋亡的作用及影响机制.结果:经酶切、测序鉴定,重组质粒均在1200 bp左右出现酶切条带,符合设计要求.RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,5637细胞经小RNA干扰后Bmi-1的mRNA和蛋白质表达水平明显降低,P＜0.05.与阴性对照组和未转染组相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞增殖明显受到抑制,P＜0.05.转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率分别为19.95%和27.27%,与未转染组7.23%和阴性对照组6.78%相比,转染Bmi-1 shRNA组细胞凋亡率明显增加,P＜0.05.结论:减少膀胱癌5637细胞Bmi-1基因的表达可抑制5637细胞增殖并促进细胞凋亡.
膀胱肿瘤、RNA干扰、5637细胞、表达载体、细胞增殖、细胞凋亡、基因表达
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R737.14(肿瘤学)
武警医学院博士基金WBS200811
2010-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
835-838,846
