滤纸挑选克隆方法在筛选稳定表达细胞株中的应用

摘要：

目的:利用滤纸挑选克隆方法简单、有效地筛选稳定表达VEGF-C shRNA的乳腺癌MCF-7细胞株.方法:用已构建的表达VEGF-C shRNA的重组质粒裁体pSIREN-VEGF-C转染乳腺癌MCF-7细胞,利用嘌呤酶素筛选阳性克隆;以滤纸法挑选阳性克隆并扩大培养成稳定表达的细胞株;荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测稳定表达的细胞株中VEGF-C的表达情况.结果:用滤纸法挑选并培养出的稳定表达细胞株中,VEGF-C的mRNA及蛋白表达均明显下调,抑制率分别为95%及100%,P<0.05.结论:利用滤纸挑选克隆方法成功筛选稳定表达VEGF-C shRNA的乳腺癌MCF-7细胞株,并将其命名为MCF-7/V-C.

关键词：抗体、单克隆、血管内皮生长因子C、基因表达、细胞系、肿瘤

所属期刊栏目：17

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30971146;广东省科技厅资助项目2009B030801350;广州医学院自然科学基金2008A05

在线出版日期：2010-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：801-804