人BRMS1干扰质粒的构建及其有效性的鉴定

摘要：

目的:构建针对人BRMS1基因的RNA干扰表达载体并检测其有效性,为后续研究提供基础.方法:设计合成针对人BRMS1的特异性siRNA前体寡核苷酸,依次通过退火,连接,构建含前体siRNA的重组质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-BRMS1-si-RNA.经测序鉴定后,通过脂质体介导将其与pDsRed2-N1-BRMS1质粒(包含BRMS1红色荧光融合蛋白的载体)共转染人胚肾293细胞.分别用倒置荧光显微镜和流式细胞术观察转染细胞中红色荧光蛋白的强度,检测干扰效果.结果:确定了两时针对人BRMS1的siRNA片段.经测序鉴定,两种含前体siRNA的质粒均构建成功.共转染后,倒置荧光显微镜下观察可见,两种siRNA均能明显降低细胞中BRMS1的表达;用流式细胞仪检测证实,siRNA1及siRNA2分别使BRMS1表达下降67.33%和76.67%,与阴性对照组比较差异有统计学意义,P＜0.05.结论:成功构建了针对人BRMS1基因的siRNA表达质粒,为进一步利用RNA干扰技术研究BRMS1功能与作用机制奠定了基础.

关键词：乳腺癌转移抑制基因1、RNA干扰、小干扰RNAs

所属期刊栏目：17

分类号：R73-3(肿瘤学)

资助基金：国家重大科学研究计划2006CB910501;上海市科委资助项目06DZ19504

在线出版日期：2010-06-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：401-405