牛蛙核糖核酸酶的表达和鉴定及功能检测

摘要：

目的:在大肠埃希菌中高效表达牛蛙核糖核酸酶(rana catesbeiana ribonuclease, RC-RNase),并对其纯化产物进行噻唑蓝(tetrazolium blue, MTT)实验,观察对肝癌细胞的抑制效果.方法:用异丙基硫代-D-半乳糖苷(isopropylthio-D-galactoride, IPTG)诱导原核表达质粒PET32a-RC-RNase在大肠埃希菌E.coli Bl21(DE3)plysS中表达.菌体经超声、离心后,用Ni-NTA Agarose亲和层析法对包涵体进行纯化.采用MTT法检测纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞的杀伤活性.结果:纯化的目的蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel eletrophoresis, SDS-PAGE)蛋白电泳表明,RC-RNase在大肠埃希菌中是以包涵体的形式表达.用MTT法的结果中可以看出,纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞具有一定的抑制效果,其IC50值(半抑制浓度)是22.44 μg/mL.结论:牛蛙核糖核酸酶在大肠埃希菌中得到大量表达,为进一步研究其生物学特性以及功能打下了良好的基础.

关键词：癌、肝细胞、核糖核酸酶、大肠埃希菌、比色法

所属期刊栏目：12

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：中国科学院资助项目30370810

在线出版日期：2006-03-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：1761-1763