人血清中非Gal异种抗体检测方法的探讨

摘要：

目的 探讨人血清中抗非半乳糖(Gal)异种抗原抗体的最佳检测条件.方法 选用α-1,3-半乳糖基转移酶基因敲除(GTKO)五指山小型猪的外周血单核细胞(PBMC)作为靶细胞,与健康人血清混合,在不同血清浓度(4.8％、16.7％、100％)和孵育时间(0.5、1.0、2.0、3.0、6.0h)条件下,利用流式细胞仪检测GTKO猪的PBMC上结合IgM和IgG的水平.结果 在16.7％血清浓度下,孵育时间从0.5 h延长至3.0 h,能显著提高非Gal IgM结合PBMC的水平(P＜0.01),而IgG水平的提高则差异无统计学意义(P＞0.05).提高血清浓度也可提高非Gal IgM的结合水平,采用100％的血清浓度孵育3h,IgM结合PBMC水平最高且有统计学意义(P＜0.01).采用100％的血清孵育6h,IgG结合水平升高有统计学意义(P＜0.05).延长孵育时间和提高血清浓度不会影响PBMC的活力.结论 检测人血清中抗非Gal异种抗原抗体的最佳条件为每1×105个猪PBMC,采用100％人血清浓度孵育3h检测IgM水平,或加100％人血清浓度孵育6h检测IgG水平.这一条件的优化有助于筛选非Gal表达抗原低表达的供体猪.

关键词：异种移植、外周血单核细胞、非Gal抗原、流式细胞术、IgM/IgG、α-1、3-半乳糖基转移酶、基因敲除、五指山小型猪

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分类号：R-332;R617(医学研究方法)

资助基金：深圳市高水平医学学科建设专项基金2016031638;深圳市三名工程;深圳市科创委学科布局项目JCYJ20160229204849975;深圳市科创委企业工程中心项目GCZX2015043017281705;深圳市卫计委临床技术研究与转化类201501018

在线出版日期：2017-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：132-137