肾移植受者血清抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化

摘要：

目的：探讨肾移植术后出现排斥反应的受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提取和纯化方法。方法首先分离培养人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）。收集肾移植术后肾功能不良受者的血清样本，应用流式细胞术进行抗血管内皮细胞特异性抗体的筛选；用 Luminex 抗体检测平台检测血清中抗人类白细胞抗原（HLA）和主要组织相容性复合体Ⅰ类相关链 A （MICA）的抗体。在确定血清标本中存在有抗血管内皮细胞特异性抗体后，用 HUVEC 将其吸附。洗涤细胞后再将吸附的抗体从细胞膜上洗脱下来，再用 Protein-A ／G 磁珠再次纯化和浓缩洗脱液中的抗体 IgG。采用流式细胞术检测洗脱液中抗体活性，用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）凝胶和免疫印迹法鉴定纯化的抗血管内皮细胞特异性抗体（IgG）。结果在386例肾移植受者的血清中，选取血清肌酐（Scr ）＞400μmoI ／L、抗 HLA 抗体阴性、抗 MICA 抗体阴性和荧光反应强度（MFI）＞16的5例受者的血清样本，纯化后的抗血管内皮细胞特异性抗体 IgG 在 SDS-PAGE 凝胶显示免疫球蛋白重链（纯度＞95％）。流式细胞术结果显示纯化的抗体具有重新结合血管内皮细胞表面抗原的特性。结论采用人脐静脉血管内皮细胞吸附肾移植受者血清中抗血管内皮细胞特异性抗体的提纯方法可取得较好效果。

关键词：肾移植、免疫排斥反应、抗血管内皮细胞特异性抗体、抗体吸附、人血管内皮细胞

分类号：R617;R392.2;R392.4(外科手术学)

资助基金：国家自然科学基金81273265；湖南省科技重点项目2013FJ2005；湖南省医学卫生科技项目B2013-003；湖南省高校2011创新协同中心生物发育与新产品创新研发中心支持项目

在线出版日期：2015-06-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：146-151