肝癌相关成纤维细胞对单核细胞来源树突状细胞分化的影响

摘要：

目的 研究肝癌相关成纤维细胞(hCAF)在单核细胞(Mo)来源树突状细胞(DC)分化过程中所起到的作用.方法 采用酶消化法从肝癌组织中分离培养获得人hCAF;采用密度梯度离心法获取健康人外周血单个核细胞(PBMC),经密度梯度离心及磁珠分离法从健康人外周血浓缩白细胞中获得CD14+ Mo.hCAF-CD14+ Mo(1:10)和CD14+ Mo细胞在第1日及第4日均加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(20 ng/ml)和白细胞介素4(20 ng/ml),共诱导6d.两组细胞分为两份,一半加入脂多糖(LPS) 200 ng/ml刺激3d,另一半不加入LPS作为对照.最后细胞共分为4组:hCAF-Mo组、hCAF-Mo+ LPS组、不成熟DC (iDC)组及成熟DC (mDC)组.采用倒置荧光显微镜观察4组细胞的形态变化.各组细胞分为两部分,一部分细胞采用流式细胞术检测细胞表面分子CD83、CD80、CD1a的表达情况,另一部分细胞分别与预染CFSE的淋巴细胞共培养5d,采用流式细胞术检测T淋巴细胞增殖情况.结果 倒置显微镜结果显示在hCAF干扰下Mo不能分化为DC.CD83、CD1a、CD80的表达在iDC组分别为(3.2±0.7)％、(61.7±8.4)％、(30.1±0.9)％,mDC组分别为(80.1±2.8)％、(83.2±6.0)％、(96.1±1.9)％,hCAF-Mo组分别为(1.6±0.9)％、(1.8±0.9)％、(16.0±3.2)％,hCAF-Mo+ LPS组分别为(9.0土1.2)％、(1.1±0.4)％、(58.4±3.6)％.hCAF-Mo组与iDC组的CD1a、CD80表达差异均有统计学意义(均为P＜0.01).iDC组的CD83表达极低,因此hCAF-Mo组与iDC组的CD83表达差异没有统计学意义(P＞0.05).hCAF-Mo+LPS组与mDC组的3种表型表达差异均有统计学意义(均为P＜0.01).iDC组的T淋巴细胞增殖率为(3.3±0.9)％,mDC组为(34.5±7.3)％,hCAF-Mo组为(5.3±1.2)％,hCAF-Mo+ LPS组为(7.0±1.2)％.与iDC组相比,mDC组能有效地刺激T淋巴细胞增殖.hCAF-Mo组和hCAF-Mo+ LPS组刺激T淋巴细胞增殖的能力均较弱,与mDC组相比差异有统计学意义(均为P＜0.01).结论 hCAF可明显抑制Mo分化成DC,在肝癌的免疫逃逸过程中发挥重要的作用.

关键词：癌、肝细胞、肝癌相关成纤维细胞、树突状细胞、免疫逃逸

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分类号：R617(外科手术学)

资助基金：国家自然科学基金81170452、81170451、81300365、81370575;广东省自然科学基金9251008901000020;广东省科技计划基金2010B050700003、2011B031800103;广州市科技计划重点项目2011Y1-00033

在线出版日期：2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：107-112