人羊膜上皮细胞培养液抑制角膜炎症的实验研究

摘要：

目的 探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cell,HAEC)培养液对角膜炎症反应的抑制作用及机制.方法 体外培养及鉴定HAEC和兔角膜上皮细胞,制备HAEC培养液.根据培养兔角膜上皮细胞的培养液成分不同分为无血清改良杜氏培养基(Dulbeccos modified Eagles medium,DMEM)组(DMEM组)、无血清DMEM与HAEC培养液1:1混合组(混合组)、HAEC培养液组(HAEC组).传代的角膜上皮细胞贴壁24 h后,用磷酸盐缓冲液润洗后按分组更换为上述3种培养液培养48 h后收集细胞.应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HAEC培养液中白介素-1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的含量.采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测3组培养液中兔角膜上皮细胞中的白介素(IL)-1β信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)的表达,采用八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octapeptide,CCK-8) 法检测3组细胞的增殖情况.结果 HAEC和兔角膜上皮细胞的形态学观察符合上皮细胞特征.HAEC培养液中IL-1Ra的含量为(153.56±0.36)ng/L,无血清DMEM对照中未检出IL-1Ra.3组培养液中,兔角膜上皮细胞的IL-1β mRNA表达由低至高分别为HAEC组、混合组和DMEM组,3组的IL-1β mRNA表达差异均有统计学意义(均为P<0.05).兔角膜上皮细胞分组培养24、48、72 h后,HAEC组的兔角膜上皮细胞吸光值明显高于混合组和DMEM组,DMEM组的兔角膜上皮细胞吸光值在各时间点均低于混合组(均为P<0.05).结论 HAEC可分泌IL-1Ra抑制角膜上皮细胞IL-1β的表达,减少炎症反应及移植排斥作用,并促进角膜上皮细胞增殖.

关键词：羊膜移植、羊膜上皮细胞、角膜上皮细胞、白介素-1、白介素-1受体拮抗剂、细胞增殖、炎症、免疫排斥

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分类号：R617(外科手术学)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目81100637;广东省科技计划项目2009B030801231

在线出版日期：2013-04-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：12-18