禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2异源表达体系的建立

摘要：

本研究旨在利用草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda昆虫细胞Sf9-杆状病毒表达系统筛选禾谷镰孢菌Fusarium graminearum β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2 在昆虫细胞中的异源表达载体和分离纯化所用的去污剂,为后续研究该蛋白与药剂的结合模型提供基础.通过对杆状病毒表达质粒pFastBac进行设计和改造、利用同源重组的方法构建质粒、使用昆虫细胞表达系统对重组蛋白进行异源表达、筛选适合提取目的蛋白的去污剂等方法,得到适合禾谷镰孢菌β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2 异源表达的载体和分离目的蛋白的方法.结果表明,载体pFastBac-GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2、pFastBac-GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2 和pFastBac-FgRHO-TEV-8×His均可在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9 表达系统中进行表达,其中:GP67-8×His-GFP-TEV-FgGLS2 融合蛋白可以用去污剂十二烷基二甲胺氧化胺(dodecyldimethylamine oxide,DDAO)从细胞膜上分离,HA-8×His-GFP-TEV-FgGLS2 融合蛋白可以用去污剂十二烷基-β-D-麦芽糖苷(n-dodecyl-β-maltoside,DDM)、十烷基-β-D-麦芽糖苷(n-decyl-β-maltoside,DM)或DDAO从细胞膜上分离,GP67-6×His-2×Strep-TEV-FgGLS2 融合蛋白可以用去污剂DM或DDAO从细胞膜上分离.本研究首次成功地在草地贪夜蛾昆虫细胞Sf9 表达系统中表达了β-1,3-葡聚糖合成酶催化亚基GLS2,FgRHO蛋白可促进FgGLS2 的稳定表达,并筛选到适合FgGLS2 提取的去污剂DDAO.

关键词：禾谷镰孢菌、β-1、3-葡聚糖合成酶、催化亚基、昆虫细胞表达系统、去污剂

所属期刊栏目：25

分类号：S435.121.45(病虫害及其防治)

资助基金：国家重点研发计划;江苏省六大人才高峰高层次人才项目;霍英东教育基金

在线出版日期：2023-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：611-620