盐泽螺旋藻藻蓝蛋白裂合酶CpcS的分子克隆及功能研究

摘要：

为研究盐泽螺旋藻(Spirulina subsalsa)藻蓝蛋白裂合酶CpcS的催化功能,首先通过PCR技术从S.subsalsa FACHB351基因组DNA中扩增藻蓝蛋白裂合酶的编码基因SscpcS,构建表达质粒pCDFDuet-SscpcS,然后再与脱辅基蛋白和色素合成酶表达质粒pETDuet-SscpcB-Ssho1::SspcyA共同转入大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,异丙基硫代半乳糖苷)诱导重组合成藻蓝蛋白.PCR产物测序表明SscpcS扩增成功;双酶切检测和SDS-PAGE电泳分析表明质粒pCDFDuet-SscpcS构建成功,且能表达目的蛋白.重组藻蓝蛋白PCB-CpcB细胞产物为深蓝色;纯化后的色素蛋白展现620 nm的最大吸收峰和646 nm的最大荧光发射峰;色素蛋白通过锌离子染色,在紫外线照射下展现明显荧光.该研究成功克隆源自盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白裂合酶SsCpcS的编码基因,其表达产物SsCpcS能有效催化藻蓝蛋白的生物合成.此研究为S.subsalsa藻蓝蛋白的重组合成及抗氧化试剂的研制奠定基础,也为探明盐泽螺旋藻中CpcS的催化机理提供科学依据.

关键词：盐泽螺旋藻、裂合酶、藻蓝蛋白、重组表达、生物合成

所属期刊栏目：40

分类号：Q71(生物大分子的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金项目41977354;江苏省自然科学基金青年基金BK20150884;江苏省高校优势学科建设工程项目

在线出版日期：2019-12-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1048-1055