鸡Atg5基因过表达载体的构建与功能验证

摘要：

鸡肉占肉质消费品首位,过多的脂质沉积会降低肉质.研究表明自噬参与肝脏脂质代谢,改善脂质沉积,从而调控禽类脂质代谢.本研究旨在探究自噬相关基因5(autophagy related gene 5,Atg5)对鸡(Gallus gallus)成纤维细胞系DF-1细胞内的脂质代谢相关基因的影响.根据NCBI数据库中鸡ATG5蛋白(NP_001006409.1)氨基酸序列,利用ExPASy数据库对鸡ATG5蛋白进行理化特性分析;利用qPCR技术检测鸡各组织中Atg5基因的表达情况;构建过表达重组质粒pcDNA3.1-Atg5,并且利用RNAi技术干扰Atg5表达;最后,检测干扰和过表达Atg5后相关脂代谢基因:载脂蛋白B(apolipoprotein,ApoB)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACACA)、过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)、叉头转录因子-1(forkhead box protein-1,Foxo1)、脂肪酸结合蛋白7(fatty acid-binding protein 7,FABP7)、分拣蛋白1(sortilin 1,Sort1)的表达情况;结果表明:鸡ATG5蛋白是相对分子质量为32.478 kD的不稳定蛋白质,Atg5在各组织中均有表达,其中以胸肌组织中表达量最高;此外,成功构建过表达载体pcDNA3.1-Atg5,筛选出最优干扰siRNA—siRNA-330,过表达或干扰Atg5基因对其他脂代谢相关基因的表达情况均有影响;其中,过表达Atg5后,ApoB的表达量显著降低,Sort1的表达量显著增加,FABP7变化不显著;干扰Atg5后,FABP7和ApoB的表达量显著提高,Sort1变化不显著,推测三者与Atg5可能存在潜在联系.本研究为进一步研究鸡Atg5基因的功能提供参考依据.

关键词：自噬相关基因5(Atg5)、自噬、脂质代谢、鸡

所属期刊栏目：30

分类号：S831.2(家禽)

资助基金：国家自然科学基金;江苏省自然科学基金

在线出版日期：2022-04-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：716-725