坝上长尾鸡TYR基因核心启动子鉴定与单核苷酸多态性分析

摘要：

酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)作为参与黑色素形成并起调节作用的关键酶,对于动物毛色表型具有重要意义.TYR功能异常会阻断黑色素形成通路,TYR突变会产生白化而导致皮肤、被毛和羽毛呈现白色表型.基因启动子区的转录调控对基因表达具有重要作用.为探明坝上长尾鸡(Gallus gallus)TYR基因启动子活性区及其结构,本研究首先构建了双荧光素酶表达载体,通过脂质体瞬时转染至鸡胚成纤维细胞DF1,利用双荧光素酶检测试剂盒进行启动子活性检测;进而成功克隆了TYR基因5'侧翼区片段1813 bp,构建了7个含有不同长度启动子片段的表达载体(P1～P7)及2个启动子区突变载体(mut-1和mut-2),确定了鸡TYR基因启动子的核心区域为-810～+65,其中-810～-213区域可能存在重要的正向调控元件SP1、Oct-1、GATA-1、C/EBP、SRF、NF-1、YY1、NF-κB、TBP和AP-1的结合位点.通过测序筛选出-963～-957、-955、-932、-692、-391和-321等6个多态位点,利用SHEsis软件预测到8种单倍型:Hap 1～Hap8;白羽鸡和黑羽鸡基因型及等位基因频率差异显著(P＜0.05),白羽鸡的优势基因型分别为BB、DD、FF、II、KK和MM,Hap1频率为100％,黑羽鸡的优势基因型分别为AA、CD、EF、HH、JJ和LL,Hap2频率最高为40％;突变体mut-2的活性值显著低于其对应的非突变体P2,突变体mut-1的活性值显著低于其对应的非突变体P6(P＜0.05).上述6个多态位点可能是影响TYR基因启动活性的重要位点,但不是全部的作用位点.启动子活性降低可能影响TYR基因转录,从而影响黑色素合成.本研究探明了坝上长尾鸡TYR基因启动子活性区及其结构,为深入探讨该基因在毛囊组织中的表达调控提供了实验依据.

关键词：鸡、酪氨酸酶基因(TYR)、启动子、转录因子、多态位点

所属期刊栏目：26

分类号：S831.2(家禽)

资助基金：河北省现代农业产业技术体系蛋鸡产业创新团队项目HBCT2013090206;河北省科技计划项目15226302D

在线出版日期：2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：959-969