有机溶剂对野生型枯草芽胞杆菌转化效率的影响

摘要：

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)作为一种动物益生菌,可以直接添加在动物日粮中,提高动物对营养物质的消化吸收.随着基因技术的快速发展,枯草芽孢杆菌表达系统被广泛的应用于畜牧行业.为提高枯草芽孢杆菌感受态细胞的转化效率,在感受态细胞的制备过程中添加不同种类,不同体积浓度的有机溶剂以此达到优化制备方法和提高转化效率的目的.本实验在野生型枯草芽孢杆菌LN感受态细胞制备过程中,分别添加体积比为1.0％、2.0％、3.0％、4.0％和5.0％的吐温-80、甲醇和丙酮,统计感受态细胞的复活菌数.将目的基因长度为500和2 680 bp的外源质粒pGEM-kpgt、pGEM-kmpgt通过化学转化的方式分别转入制备好的感受态细胞中,以P4326F/P4326R、KgF/KgR为引物,利用PCR验证转化结果,并计算转化效率.结果显示,在野生型枯草芽孢杆菌LN感受态细胞的制备过程中添加4.0％的甲醇,所制备的感受态细胞复活数最多为546±13个/μL,经转化后可获得52±4个转化子/μg,转化效率最高;目的基因片段长度延长至2～3 kb,转化效率为29±2个转化子/μg.通过对感受态制备方法的改进,提高了枯草芽孢杆菌感受态的转化效率,为枯草芽孢杆菌基因工程研究提供参考.

关键词：野生型枯草芽孢杆菌、有机溶剂、感受态细胞、复活菌数、转化效率

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分类号：S-3(农业科学研究、试验)

资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目31101744;河南省重大科技专项131100110300

在线出版日期：2018-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1878-1886