粤黄鸡PGCs无饲养层培养体系的建立

摘要：

原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)是生殖母细胞的前体细胞,作为一种多能干细胞,具有与胚胎干细胞相似的形态及分化潜能,能在体外进行培养、传代,并在一定条件下保持未分化状态及多能性.现阶段PGCs的体外培养体系中往往存在饲养层细胞和血清,为后期研究造成了困难和混淆.为建立粤黄鸡(Gallus gallus) PGCs的体外无饲养层培养体系.本研究通过改进培养体系成分分离纯化PGCs并进行体外培养.结果显示,所得无饲养层培养的PGCs直径为6～8μm,生长曲线呈现“S”形,群体倍增时间(3.75±0.15)d,结果表明,PGCs具有良好的增殖生长状态;对分离纯化的PGCs特异性基因胚胎阶段特异性表面抗原(stage specific embryonic antigen-1,SSEA-1)和类无精症缺失基因(deleted inazoospermia-like,DAZL)进行免疫荧光鉴定,结果显示二者在PGCs均有表达,经化学免疫染色的细胞可观察到绿色的荧光;将无饲养层培养的PGCs用PKH26标记,注射到孵化至17～20期受体鸡胚的背主动脉中,继续孵化至第5.5天,结果显示,分离纯化并通过PKH26标记的鸡胚血液PGCs仍然具有PGCs的特性,可随鸡胚的血液循环定殖于鸡胚性腺中.本研究优化了PGCs体外培养的条件,建立无饲养层无血清培养体系,为家禽PGCs应用于现代保种技术、转基因技术以及家禽的发育生物学等研究领域提供了重要的技术支持.

关键词：原始生殖细胞(PGCs)、无饲养层、PKH26、胚胎注射

所属期刊栏目：25

分类号：S852.21(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金31201871

在线出版日期：2017-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1366-1373