转座子介导细胞质显微注射技术的基因转移效率比较

摘要：

为了比较和探索SB(sleeping beauty)、PB(piggyBac)和T012 3种转座子介导下的细胞质显微注射法在小鼠(Mus musculus)和斑马鱼(Danio rerio)上的转基因效率,本研究将包含3种转座子的重组载体pT3-PST-CAG-GFP分别与3种转座酶表达载体以1:1质量比混合,显微注射至小鼠和斑马鱼受精卵细胞质,经体外培养后在胚胎发育不同时期用荧光显微镜检测报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性率,结果显示,在培养至4 Ed(96 h)(Ed: embryo day,胚胎发育的天数)的小鼠胚胎中,PB转座子介导的GFP转基因阳性率最高,达52％(N=281),显著高于SB的47％ (N=328)和To12的36％ (N=273)(P＜0.05);而受精后36和60 h (hour past fertilization,hpf)斑马鱼胚胎中,荧光显微镜检测表明,To12的GFP阳性率分别为36％(N=677)和37％(N=685),显著高于SB(28％ N=691和27％ N=708)和PB(30％ N=687和32％ N=675)(P＜0.05);转座子介导的细胞质显微注射可获得较高的转基因效率,且转座子活性具有物种差异性,在哺乳动物胚胎中PB转座子的基因转移效率最高,而在鱼类胚胎中To12转座子的基因转移效率最高.本研究为提高动物转基因效率研究提供重要参考资料.

关键词：小鼠、斑马鱼、转座子、细胞质显微注射

所属期刊栏目：24

分类号：Q78;S865.1(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家转基因重大专项重点课题子课题No.2014ZX08006005-008、江苏省产学研联合创新资金-前瞻性联合研究项目No.BY2013063-03、中国博士后科学基金No.20100480371和江苏省普通高校学术学位研究生科研创新计划项目No.KYLX_1357

在线出版日期：2015-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：151-156