葛根素对奶牛乳腺上皮细胞炎症模型中NF-κB信号通路的影响

摘要：

葛根素(puerarin,Pue)是从豆科植物葛根(Pueraria lobata)的根部提取的一种异黄酮,具抗炎作用.为探讨葛根素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的奶牛(Bos taurus)乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells, bMECs)炎症的抗炎机制,本研究通过胶原酶消化法培养原代的bMECs,采用免疫荧光法鉴定bMECs中特有标记物人细胞角蛋白18(cytokeratin-18,CK-18),Western blot检测β-酪蛋白(β-casein);细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)筛选LPS刺激bMECs产生炎症反应的最佳浓度,酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、白介素-1 β(interleukin-1 beta,IL-1β)的含量变化;将bMECs分成空白对照组、炎症模型组、葛根素药物组和地塞米松(dexamethasone,Dex)阳性对照组,用Western blot检测细胞中p-IκB-α、IκB-α、p-p65和p65蛋白的表达变化.研究发现,原代培养的细胞中存在特异性CK-18和β-casein,证明其为bMECs;经LPS刺激bMECs 24 h,炎症模型组细胞培养上清中TNF-α和IL-1β的含量比空白对照组显著升高(P＜0.05),证明bMECs炎症模型建立成功;葛根素处理组细胞中p-IκB-α蛋白较炎症模型组显著降低(P＜0.05),p-p65蛋白极显著降低(P＜0.01),且细胞培养液上清中TNF-α的含量极显著降低(P＜0.01),与地塞米松阳性对照组趋势一致,但两组无显著差异.结果表明,葛根素可通过抑制核转录因子(nuclear transcription factor-κappaB,NF-κB)信号通路的活化,降低其下游炎性因子TNF-α的表达,起到抗炎作用.本研究为临床上开发抗炎药物及治疗奶牛乳房炎打下了一定基础.

关键词：奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、脂多糖(LPS)、葛根素(Pue)、核转录因子(NF-κB)

所属期刊栏目：24

分类号：S857.2+6(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金No.31172378和山东省农业技术体系创新团队岗位No.SDAIT-12-011-03

在线出版日期：2015-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：44-51