不同培养系统对鸡精原干细胞体外增殖作用的比较

摘要：

本研究比较了层粘连蛋白(laminin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、胶原蛋白(collagen)以及睾丸支持细胞(sertoli cell)4种不同培养系统对鸡(Gallus gallus)精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)体外增殖的作用效果.采用三酶两步消化法分离SSCs,细胞经明胶差速纯化后培养,将传至3代的SSCs重新接种于层粘连蛋白、纤维连接蛋白和胶原蛋白包被的培养皿中以及睾丸支持细胞制备的饲养层上,通过形态学、5-乙基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)细胞增殖、qRT-PCR技术检测不同培养系统对鸡精原干细胞体外增殖的作用效果.结果表明,鸡SSCs的碱性磷酸酶(AKP)阳性克隆数在睾丸支持细胞组最高,达到每视野(32±3)个,层粘连蛋白组、纤维连接蛋白组和胶原蛋白组分别为(26±3)、(24±2)和(23±2)个,三组差异不显著(P＞0.05); EDU检测睾丸支持细胞组细胞增殖率为(92.82±2.15)％,显著高于三组基质蛋白组(P＜0.01); qRT-PCR结果显示,增殖标记基因原癌基因(myconcogene,c-myc)、Kruppel样因子4(kruppel-like factor 4,Klf4)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在睾丸支持细胞组的表达量最高,其次为层粘连蛋白组,c-myc和Klf4在纤维连接蛋白组中的表达要高于胶原蛋白组,PCNA则相反.实验结果表明:三组基质蛋白及睾丸支持细胞都能够促进鸡SSCs的体外增殖,其中睾丸支持细胞作用最佳,其次为层粘连蛋白,纤维连接蛋白和胶原蛋白两者作用效果差异不显著.该结果为进一步优化鸡胚SSCs的体外培养体系,阐明生殖细胞增殖机制提供了实验基础和理论支撑.

关键词：胶原蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白、睾丸支持细胞、鸡、精原干细胞

所属期刊栏目：22

分类号：R28;R32

资助基金：国家自然科学基金项目31272429, 31301959;高等学校博士学科点专项基金新教师类资助课题2012325012000;江苏省普通高校研究生科研创新计划项目CXLX12-0928;江苏高校优势学科建设工程资助项目

在线出版日期：2014-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：736-743