兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白A(OmpA)重组蛋白单克隆抗体的制备及潜在应用

摘要：

制备兔多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)外膜蛋白A(OmpA)重组蛋白单抗,为兔多杀性巴氏杆菌病的诊断提供特异性强,灵敏度高的单克隆抗体.本研究选取并扩增Pm外膜蛋白基因OmpA,原核表达获得了的大小为37.6 kD的OmpA重组蛋白,以纯化复性的兔多杀性巴氏杆菌OmpA重组蛋白作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),取其脾细胞与SP2/0细胞融合,ELISA筛选出了4株分泌Pm OmpA蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为5D2、BC11、2A2和6A4.其中2A2细胞培养液效价为1∶256,5D2、BC11和6A4效价为1∶128;2A2腹水效价为1∶12 800,其余3株达1∶6 400.杂交瘤细胞经反复冻存、复苏及多次传代,仍能稳定分泌高效价抗体.Western blot显示,4株单克隆抗体均能与Pm OmpA重组蛋白重组发生特异性反应.用ELISA方法鉴定2A2单克隆抗体亚型为IgG2b,ProteinA亲和纯化2A2腹水抗体,获得的单抗浓度为130 μg/mL.选取纯化的2A2单克隆抗体进行潜在应用研究,Western blot与间接免疫荧光结果显示,单克隆抗体能与兔多杀性巴氏杆菌分离菌株发生特异性反应.表明利用体外重组表达兔多杀性巴氏杆菌OmpA融合蛋白制成的杂交瘤能够稳定分泌效价高、特异性强的单克隆抗体,可用于兔多杀性巴氏杆菌诊断,本研究结果为兔多杀性巴氏杆菌诊断试剂盒的研制提供技术参数.

关键词：多杀性巴氏杆菌、外膜蛋白A(OmpA)、重组蛋白、单克隆抗体

所属期刊栏目：20

分类号：S85;R75

资助基金：国家兔产业技术体系CARS-44-C-2

在线出版日期：2012-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：676-681