牛nanog基原核表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

从6周龄的胎牛(Bos taurus)原始生殖嵴中提取总RNA,通过RT-PCR扩增nanog基因,将其克隆到PMD-18T载体,然后再亚克隆到pGEX-KG表达载体上,获得原核表达质粒pGEx-KG-nanog,限制性内切酶分析和DNA测序证明所插入片段为牛nanog基因编码序列.重组质粒转化大肠杆菌JM109(Escherichia coli),在不同的培养温度(25、30和37℃)和不同浓度的IPTG(0.10、0.25、0.50、1.00和2.00mmol/L)诱导下均获得了表达,结果表明,培养温度和IPTG浓度对GST-Nanog融合蛋白在大肠杆菌中的表达影响甚微;经Western blot检测证实该蛋白约60kD,并具有GST抗原活性,证实目的蛋白为Nanog蛋白.

关键词：nanog、分子克隆、原核表达、牛

所属期刊栏目：16

分类号：S188(农业生物学)

资助基金：国家高技术研究与发展计划863项目2005AA219050;教育部重大项目03160;国家自然科学基金36071067;陕西省重大科技专项2006kz05-G1

在线出版日期：2008-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：770-774