芥菜新型几丁质酶基因在酵母(Pichia pastoris)中的分泌表达

摘要：

BjCHII基因是从芥菜(Brassicajuncea)中克隆的1个新型几丁质酶基因,编码含2个几丁质结合域的几丁质酶.本研究曾试图在大肠杆菌中表达该基因而未成功,因此试在酵母中表达.按照BjCHI1 cDNA全序列设计特异引物,通过PCR扩增获得成熟肽第1密码子至最后密码子之间的片段,克隆到载体pPIC9K上,测序验证无误后,转化酵母KM71.获得6个抗1.0 mg/mL遗传霉素(G418)水平的阳性转化子.PCR鉴定表明外源基因已经整合到酵母染色体上.此6个菌株经初步诱导,均表达出预期的蛋白质.对其中表达效率相对较高的KM71-17-1菌株作进一步的诱导表达,结果表明在诱导第3天后产生的外源蛋白达最大值.至此,成功地获得了BjCHI 1蛋白,为进一步研究奠定了基础.

关键词：酵母、基因表达、BjCHI1基因、几丁质酶

所属期刊栏目：10

分类号：S6(园艺)

资助基金：国家自然科学基金39970518

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：33-35