发酵床垫料中微生物16S rDNA PCR反应条件的建立与优化

摘要：

为探讨发酵床垫料中微生物16S rDNA基因扩增实验中诸多因素对实验结果的影响，采用单因素法对16S rDNA基因扩增时PCR反应体系中的5个潜在因素（Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、模板DNA）5水平上进行优化实验，并进一步优化了反应程序中的退火温度、循环次数。结果表明：25μL的最佳反应体系为：10×PCR buffer 2.5μL、MgCl22.0 mmol·L-1、dNTP 0.2 mmol·L-1、引物0.2μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.5 U、模板DNA 50 ng；最佳反应程序为：在94℃下进行4 min预变性；随后循环扩增25个循环（包括94℃变性45 s，53.7℃退火30 s，72℃延伸90 s）；最后在72℃下延伸10 min。

关键词：发酵床垫料、16S rDNA、单因素法、退火温度

分类号：Q93-331(微生物学)

资助基金：湖南省农业产业技术体系“湖南省生猪产业技术体系生猪产业规模养殖与环境控制岗位”

在线出版日期：2014-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：470-475