高粱抗虫基因CYP71E1表达载体的Gateway技术构建

摘要：

[目的]探讨高粱HCN途径关键酶CYP71E1基因对玉米幼苗抗螟虫的影响,为培育抗玉米螟新品种奠定基础.[方法]以高粱自交系BTx623幼苗总RNA为模板,反转录成cDNA,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出1854 bp的CYP71E1基因全长.利用基于位点特异性重组的Gateway技术,通过TOPO克隆将该基因克隆到入门克隆(pCRTM 8/GW/TOPO(@)),在LR克隆酶作用下将入门克隆重组到表达载体(pMDC141)中.[结果]成功构建pMDC141-CYP71E1表达载体并将构建好的表达载体导入农杆菌EHA105,PCR和测序表明所构建的载体及获得的工程菌与预期的完全一致.[结论]Gateway克隆技术与传统的克隆方法相比具有阳性克隆率高、快速、灵活等优点.

关键词：高粱、表达载体、Gateway、CYP71E1

所属期刊栏目：55

分类号：TQ450

资助基金：主要农作物产量性状形成的分子基础2016YFD0100400;辽宁省企业项目博士后资助137301

在线出版日期：2016-10-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：661-664