GABRG2基因敲除小鼠和HT22细胞通过激活PKA/NF-κB信号通路影响MMP3的表达

摘要：

目的 探究GABRG2基因敲除后小鼠海马和HT22细胞中基质金属蛋白酶(MMP)3的表达变化及潜在参与机制.方法 动物实验:利用Cre/loxp重组酶系统所构建的GABAA受体γ2亚基(GABRG2)基因条件性敲除小鼠(GABRG2fl/wtCre+)模型为实验组,野生型小鼠作为对照组,用Western blot技术检测小鼠海马中GABRG2、PKA、p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白的表达情况;免疫荧光技术观察海马中GABRG2、MMP3蛋白的表达情况;尼氏染色技术观察GABRG2基因缺失对小鼠海马神经元的影响.细胞实验:利用CRISPR/Cas9技术构建GABRG2基因敲除的HT22细胞为实验组,HT22细胞为对照组.Western blot技术检测各组细胞中GABRG2、PKA、p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白的表达情况;免疫荧光技术观察各组细胞中GABRG2、MMP3蛋白的表达情况.结果 动物实验:Western blot结果显示,与对照组小鼠相比,实验组小鼠海马组织中GABRG2蛋白表达降低(P<0.05),p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白表达均升高(P均<0.05),PKA蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);免疫荧光结果显示,与对照组小鼠相比,实验组小鼠海马区GABRG2表达降低,MMP3表达升高,特别在海马CA3区表达明显升高.尼氏染色结果显示,与对照组小鼠相比,实验组小鼠海马神经元的结构松散,神经元离散程度提高.细胞实验:Western blot结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞GABRG2蛋白表达降低(P<0.05),p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白表达均升高(P均<0.05),PKA表达差异无统计学意义(P>0.05);细胞免疫荧光结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞GABRG2的表达降低,MMP3的表达升高.结论 GABRG2基因缺失小鼠海马和HT22细胞均引起MMP3蛋白表达增高,其机制可能与上游PKA/NF-κB信号通路的调控有关.

关键词：GABRG2基因、基质金属蛋白酶、基因敲除、癫痫、小鼠、HT22细胞

所属期刊栏目：44

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;宁夏回族自治区十三五重大科技项目

在线出版日期：2022-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：656-662