ERK基因过表达对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

摘要：

目的 通过构建细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)过表达载体并进一步转染至肺癌A549细胞筛选得到稳定转染的细胞株并验证其过表达效果,以及测定过表达ERK后对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 从人肺腺癌A549细胞中提取RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增出ERK目的片段CDS区,构建重组过表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1α-GreenPuro-ERK,进行双酶切及测序验证.将人肺癌细胞A549分为重组ERK组和空载体组,采用脂质体转染法分别转染293T细胞进行慢病毒包装获得高滴度的慢病毒颗粒.并进一步转染至肺癌细胞A549,利用嘌呤霉素筛选稳定过表达的A549细胞.采用Real-time PCR法和Western blot实验检测稳定过表达后ERK mRNA和蛋白表达水平.利用CCK-8实验、划痕实验、transwell实验对比过表达后肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭情况,采用Western blot法检测并对比过表达后ERK/JNK通路蛋白表达变化.结果 经双酶切分析及测序验证,成功构建了ERK过表达稳转细胞株,且过表达后肺癌A549细胞增殖、侵袭能力增加(P均<0.05).过表达ERK后,p-90RSK、C-JUN、C-MYC、P-JNK、JNK蛋白水平上调(P均<0.05).结论 ERK过表达可增强人肺癌细胞A549的增殖、迁移、侵袭能力.

关键词：肺癌A549细胞、细胞外信号调节激酶、增殖、迁移、侵袭

所属期刊栏目：42

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81560573;81760661

在线出版日期：2020-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：332-339