线粒体融合基因2慢病毒干扰载体感染U87MG细胞下调靶基因表达

摘要：

目的 为研究线粒体融合基因2(mitofusin-2,Mfn2)的异常表达对人胶质瘤的影响,构建Mfn2特异性表达的RNAi慢病毒载体,并以此构建Mfn2沉默的稳定人胶质瘤细胞株.方法 设计Mfn2 mRNA的特异性siRNA,构建RNAi慢病毒载体质粒并进行测序鉴定.利用构建好的RNAi慢病毒载体质粒以及pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体3种质粒共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度.用包装好的慢病毒感染人脑胶质瘤U87MG细胞株,利用RT-PCR及Western blot测定细胞中Mfn2的转录及翻译情况;利用CCK-8实验及平板克隆形成实验检测Mfn2-RNAi对U87MG胶质瘤细胞增殖的影响.结果 质粒测序结果与目的序列一致,提示RNAi序列正确插入Mfn2基因;慢病毒包装成功,病毒滴度为4×108 TU·mL-1;病毒感染后U87MG细胞生长状态良好,荧光持续稳定表达,Mfn2转录及翻译受到抑制,LV-Mfn2-RNAi组较对照组细胞增多(P<0.05).结论 人Mfn2基因RNAi慢病毒构建成功;Mfn2沉默的U87MG细胞株构建成功;Mfn2表达降低可能促进胶质瘤细胞增殖.

关键词：RNAi、慢病毒、胶质瘤、线粒体融合基因2

所属期刊栏目：39

分类号：R392.11

在线出版日期：2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：420-424