缺氧培养下NRF-1基因对大鼠心肌细胞线粒体膜电位的影响

摘要：

目的 通过建立NRF-1基因过表达及shRNA干扰大鼠心肌细胞系探究NRF-1基因在缺氧条件下对线粒体膜电位的影响.方法 采用RT-PCR克隆大鼠心肌细胞中的NRF-1基因并将其连接至pCDH-MCS-EF1-Puro慢病毒载体,以pCDH-MCS-EF1-Puro空质粒作为对照,同时设计并合成干扰慢病毒载体;将重组质粒与包装质粒一同转染293T细胞,收集病毒颗粒后感染H9c2细胞并通过嘌呤霉素筛选获得稳定转染的细胞株;在1％O2、5％ CO2 、94％ N2条件下培养转染的细胞株48h,使用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测线粒体膜电位.结果 获得NRF-1过表达细胞株、空载体细胞株及shRNA干扰细胞株;缺氧条件下三组细胞存活率均减弱,与空病毒组细胞相比,NRF-1过表达组细胞活力较高,shRNA干扰组的细胞活力最弱;另外,流式细胞术检测线粒体膜电位发现缺氧培养后线粒体膜电位下降.与空病毒组细胞相比,NRF-1过表达细胞株线粒体膜电位下降较轻,shRNA干扰细胞株线粒体膜电位下降最明显.结论 说明大鼠心肌细胞通过NRF-1基因的过表达可以减缓由缺氧造成的线粒体膜电位的下降,提高细胞在缺氧条件下的存活能力.

关键词：核呼吸因子-1、大鼠心肌细胞、缺氧、细胞活力、线粒体膜电位

所属期刊栏目：38

分类号：R364.4(病理学)

资助基金：国家自然科学基金81360042

在线出版日期：2016-10-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：648-652,656,前插1