口蹄疫病毒VP1基因重组腺病毒的构建与鉴定

摘要：

目的 构建表达O型口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Vims,FMDV)VP1基因的重组腺病毒并对其进行鉴定.方法 将FMDV VP1基因克隆到腺病毒的穿梭载体pAdeno Vatotr-CMV5-IRES-GFP中.得到的阳性穿梭质粒经Pme Ⅰ酶线性化后.利用电转化技术将线性化的阳性质粒与腺病毒骨架载体pAdeno Vator△E1/E3共转化大肠杆菌BJ5183感受态细胞,使其在大肠杆菌中进行同源重组.将筛选到的重组病毒质粒经Pac-Ⅰ酶线性化后暴露出包装信号,通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK-293A细胞后得到重组病毒.利用报告基因GFP和细胞病变检测重组病毒滴度和感染效率,通过PCR和westem-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中的表达.结果 成功构建了表达FMDV VP1基因的重组腺病毒rAd5-VP1,其滴度为1011.87个TCID50/mL.western-blot检测重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应.结论 重组腺病毒rAd5-VP1能与FMDV阳性血清发生反应,PCR和westem-blot检测FMDV VP1基因在重组腺病毒中稳定表达.

关键词：口蹄疫病毒、重组腺病毒、VP1基因

所属期刊栏目：31

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：宁夏医科大学特殊人才启动基金项目,宁夏医科大学引进人才启动基金

在线出版日期：2009-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：566-569,封4