羊布鲁氏菌omp25基因原核表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的:利用PCR反应从羊布鲁氏菌基因组DNA中克隆omp25基因,并将其构建到原核表达载体pET -32a中.方法:试剂盒法提取羊布鲁氏菌基因组DNA,设计合适的引物,通过PCR反应从基因组中扩增外膜蛋白OMP25的编码基因(omp25).将得到的基因片段连接到克隆载体pMD19 -T的多克隆位点(MCS)中,将连接体pMD19 -T - omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析与序列测定.利用酶切与连接反应将目的基因( omp25)插入载体pET -32a的多克隆位点中,将连接体pET -32a -omp25转化感受态大肠杆菌DH5(并进行筛选和克隆扩增,提取质粒并进行酶切分析.结果:PCR扩增得到的基因片段与GenBank中已公布的羊布鲁氏菌omp25基因同源性为99％.酶切分析结果表明,omp25基因成功地插入载体pET -32a中.结论:成功地扩增得到了羊布鲁氏菌omp25基因并构建了携带该基因的重组原核表达载体pET-32a-omp25,为后续的研究提供了可靠的基础.

关键词：羊布鲁氏菌、omp25、原核表达载体、克隆、鉴定

所属期刊栏目：34

分类号：R392.11

资助基金：教育部“春晖计划”Z2007-1-01001,Z2007-1-01004;内蒙古自然科学基金2009 MS1102;内蒙古自治区科技计划项目20080502;内蒙古自治区人才开发基金

在线出版日期：2012-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：89-93