三维多孔微载体支持下人肝细胞L-02的培养

摘要：

目的:对壳聚糖三维多孔微载体培养的人肝细胞L-02进行定时的形态学观察、细胞功能和代谢活性检测.方法:本研究以自制的壳聚糖三维多孔微载体样本为支架来培养人肝细胞L-02,用细胞计数、倒置相差生物显微镜和扫描电子显微镜对其进行定时的形态学观察,并进行定时的细胞功能检测(包括测定谷草转氨酶,谷丙转氨酶和乳酸脱氢酶水平)和代谢活性检测(包括检测培养基中白蛋白、尿素、葡萄糖含量).结果:两组培养的细胞数量均呈现前3d增长,在第3d细胞数量达到最高值;而且实验组3个样本培养的细胞数与对照组无微载体培养的细胞数量相比,均始终明显高于后者,两者差异具有统计学意义(P ＜0.05),而实验组各样本培养的细胞之间无明显差异(P＞0.05);在倒置相差生物显微镜下进行动态观察,可看到前3d微载体表面黏附生长的肝细胞则逐渐增多,在第3d时可见大部分微载体表面有许多肝细胞黏附成团,总的存活率均在90%以上,且肝细胞保持着良好的形态学结构;扫描电子显微镜下,在微载体表面、切面和内部均可看到有许多球状肝细胞紧密黏附.实验组和对照组测定的AST、ALT和LDH含量在前3d持续下降,第3d降到最低,而从第4d AST、ALT、LDH含量开始重新反弹上升,但ALB、UREA和GLUCOSE含量在前3d持续上升,第3d升到最高值,而从第4d ALB、UREA和GLUCOSE含量开始逐渐下降,实验组每天测定上述各项含量始终明显高于对照组,表明两组各项含量的差异具有统计学意义(P＜0.05),提示实验组中的人肝细胞L-02代谢活性较对照组增强;而实验组中微载体样本1、2、3之间测定的各项含量无明显差异,表明实验组3个样本间各项含量的差异无统计学意义(P ＜0.05).结论:本研究以自制的壳聚糖三维多孔微载体作为一种支架,在体外三维环境下可以进行高密度细胞培养,为肝细胞移植、生物人工肝研究中进一步以微载体黏附培养足够数量、功能良好的肝细胞提供了一定的理论和实验依据.

关键词：人工肝脏、肝细胞培养、微载体、组织工程

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分类号：R730.2(肿瘤学)

资助基金：国家高新技术研究发展计划-"863"研究项目2007AA02Z487国家自然科学基金项目3项20074031,30672043和30772105

在线出版日期：2011-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：103-110