蛋白磷酸酶2A调节亚基PR55-γ 基因克隆及真核细胞表达

摘要：

目的:构建蛋白磷酸酶2A(PP2A)调节亚基PR55-γ(PPP2R2C)慢病毒过表达质粒,并在U87细胞株中稳定过表达PPP2R2C,探讨PPP2R2C对PP2A活性的影响.方法:通过反转录(RT)-PCR扩增PPP2R2C的编码序列并克隆至慢病毒载体PWPIR-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)中,获得PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体,通过酶切鉴定、质粒测序确定质粒克隆成功,用磷酸钙沉淀法将质粒转导至U87细胞中,流式细胞分析术检测U87细胞转导效率,蛋白质印迹法检测目的蛋白表达,通过PP2A蛋白免疫共沉淀法检测PP2A活性.结果:PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体构建及U87细胞株稳转过表达PPP2R2C成功,并且细胞转导效率超过90％,外源性PPP2R2C表达率上升近23倍,过表达PPP2R2C能够增强PP2A活性.结论:PWPIR-EGFP-PPP2R2C载体构建成功,并通过慢病毒转导细胞U87细胞株表达PPP2R2C成功,过表达PPP2R2C能够增强PP2A活性,为进一步研究PPP2R2C功能奠定基础.

关键词：蛋白磷酸酶2A、蛋白磷酸酶2A调节亚基PR55-γ、真核表达

所属期刊栏目：9

分类号：R329.28(人体形态学)

在线出版日期：2014-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：198-202