藤梨根乙醇提取物通过AKT/PUMA通路诱导结直肠癌细胞凋亡

摘要：

目的 研究藤梨根乙醇提取物(TLG)对结直肠癌细胞的作用及其抗肿瘤机制.方法 利用MTT检测TLG对人结直肠腺癌细胞HCT-15、LoVo的毒性,细胞平板克隆实验检测TLG对结直肠癌细胞HCT-15、LoVo增殖的影响,Hoechst-33258 染色法和流式细胞术检测TLG对结直肠癌细胞凋亡的影响,Western blot实验检测TLG对HCT-15 中相关蛋白 Caspase-3、PARP、P65、PUMA、AKT、GSK-3β表达的影响,双荧光素酶报告基因实验检测TLG对HCT-15 中相关启动子活性的影响.结果 结直肠癌细胞HCT-15、LoVo经TLG处理后,与对照组相比,细胞活力以时间及剂量依赖性下降(P<0.01,P<0.001),转染AKT cDNA、PUMA siRNA或GSK-3β抑制剂处理后能够恢复增殖(P<0.001);不同浓度TLG处理后,细胞凋亡率提高(P<0.01,P<0.001),转染AKT cDNA或GSK-3β抑制剂处理后能够遏制TLG诱导的凋亡(P<0.01,P<0.001);Western blot显示HCT-15 细胞中的p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达量随TLG浓度上升而减少(P<0.01),Cleaved-Caspase-3/Caspase-3、Cleaved-PARP/PARP、p65、PUMA蛋白表达量随TLG浓度上升而增加(P<0.05,P<0.01,P<0.001),同时转染AKT cDNA、PUMA siRNA或GSK-3β 抑制剂处理后能够阻滞 TLG 对下游蛋白 Cleaved-Caspase-3/Caspase-3、Cleaved-PARP/PARP、p65、PUMA的影响(P<0.05,P<0.01,P<0.001);报告基因结果显示NF-κB、PUMA启动子活性随TLG浓度上升而增强(P<0.05,P<0.01),同时转染AKT cDNA或GSK-3β抑制剂处理后恢复(P<0.01,P<0.001).结论 TLG可以显著诱导结直肠癌细胞凋亡,发挥较强的抑制肿瘤作用,其机制可能与AKT/PUMA信号通路有关.

关键词：藤梨根乙醇提取物、结直肠癌、细胞凋亡、AKT、GSK-3β、NF-κB、PUMA

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金;安徽省自然科学基金面上项目;分子肿瘤学国家重点实验室开放课题;安徽省高校学科专业拔尖人才学术资助项目;安徽省质量工程项目;安徽高校自然科学研究项目

在线出版日期：2023-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：532-540