重组褐藻胶裂解酶表达体系的构建及诱导条件优化

摘要：

目的 对褐藻胶裂解酶基因aly-cob进行外源表达,并优化诱导条件以实现褐藻胶裂解酶的高效表达.方法 以产褐藻胶裂解酶菌株Cobetia sp.WG-007为出发菌株,对克隆得到的褐藻胶裂解酶基因进行稀有密码子改造,构建重组质粒pET-28a(+)-aly-cob,在宿主Escherichia coli BL21 pLysS中进行诱导表达,对发酵培养基、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、诱导温度、诱导时机、诱导浓度及诱导时间进行系统优化以提高酶活.结果 构建了重组菌E.coli BL21 pLysS/pET-28a(+)-aly-cob,最适培养基为SB培养基,最佳诱导条件为OD600为1.0时加入终浓度为0.1 mmol/L的IPTG,在22℃下诱导24h后酶活可达2 403.93 U/mL.结论 成功对优化后的褐藻胶裂解酶基因aly-cob进行外源表达,经诱导表达条件优化后酶活为野生菌酶活的15倍,更具有工业化应用的潜力.

关键词：褐藻胶裂解酶、外源表达、诱导条件优化

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：江苏省产学研前瞻性联合研究项目BY2016022-19;江苏省重大科技成果转化项目BA2015006;四川省重点研发计划项目2017JZ0043;国家海洋公益性行业科研专项经费项目201305007

在线出版日期：2018-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：227-230,324