人血管内皮抑制素vasostatin120-180在大肠杆菌中的表达纯化及初步的抗血管生成活性研究

摘要：

目的:在大肠杆菌中克隆和表达人源血管内皮抑制素vasostatin120-180(VAS)基因,并进行分离纯化及抑制新生血管生成活性鉴定.方法:根据大肠杆菌偏爱密码子,应用化学合成和分子克隆方法得到人源血管内皮抑制素120-180片段(即VAS)的编码基因.通过PCR和限制性内切酶消解,将VAS编码基因克隆入大肠杆菌表达载体pET28a中,并在BL21(DE3)菌株中经IPTG诱导、表达带有His融合标签的His-VAS重组蛋白.VAS蛋白的表达水平大约占细菌总蛋白的45%,大多数目的蛋白以包涵体形式存在,经过体外包涵体变性、复性及纯化,采用SDS-PAGE分析鉴定,用鸡胚尿囊膜血管生成抑制试验进行重组蛋白活性的生物活性鉴定.结果:经DNA序列分析鉴定,重组质粒pET28a-VAS构建成功,IPTG诱导后的融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,Western blotting分析并鉴定了VAS的分子属性.通过鸡胚尿囊膜试验验证,重组VAS蛋白能够很好地抑制微血管生成.结论:获得高效表达的、高纯度的VAS,为VAS进一步的功能分析和抑制血管生成活性研究奠定了基础.

关键词：偏爱密码子、血管内皮抑制素120-180、包涵体、变复性、鸡胚尿囊膜试验

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分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30330530;30425009;江苏省自然科学基金BK2007715;江苏省卫生厅兴卫工程项目

在线出版日期：2008-05-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：75-80