pDsRED-LC3真核表达载体的构建及其在肝癌细胞系HepG2中的表达和定位

摘要：

本实验根据已知的人MAP-LC3序列,以人脑胶质瘤U251细胞cDNA为模板扩增出去除终止密码子的MAP-LC3片段,定向克隆至红色荧光融合蛋白载体pDsRed-N1质粒中,构建了重组质粒pDsRed-LC3.将pDsRed-LC3转染HepG2细胞,48 h后用Western Blot、激光共聚焦显微镜检测融合蛋白在细胞内的表达和分布情况,并观察血清饥饿时细胞发生白噬的情况.结果表明:(1)成功构建pDsRFP-LC3真核表达载体,该载体能在人肝癌细胞中表达；(2)血清饥饿应激实验证明,该载体可以良好地指示自噬泡的形成过程,为研究肿瘤细胞的自噬发生情况提供了一个重要而方便的工具.

关键词：红色荧光蛋白、MAP-LC3、自噬、肝癌

所属期刊栏目：35

分类号：Q291

资助基金：国家自然基金31100964;江苏省高校科学研究基金09KJB310002;江苏大学高级人才科研启动基金10JDG045

在线出版日期：2012-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：84-88